[發(fā)明專利]膽固醇含量分析樣品制備和膽固醇含量的自動分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310220437.1
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103323307A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝鋰紗;俞凌云;譚智;方智;胡江濤
• 申請（專利權(quán)）人: 四川出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/40;G01N35/08;G01N21/78
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 梁田

1.油脂中膽固醇含量分析樣品的制備方法，包括如下步驟：

（1）將油脂充分混勻后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，渦旋混勻后得到油脂溶液；

（2）將油脂溶液加入硅膠固相萃取小柱，從該小柱的底部孔棄去流出液；再用體積比為正己烷:乙醚=98:2的淋洗液5mL～10mL加入到硅膠固相萃取小柱中，從該小柱的底部孔棄去流出液；最后用體積比為正己烷:乙醚=92:8的淋洗液20mL～50mL加入到硅膠固相萃取小柱中，從該小柱的底部孔收集流出液備用；

（3）將上述（2）步驟的備用收集流改于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀干燥，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在真空度300KPa～500KPa，溫度為40℃～50℃條件下將所述的收集流濃縮至10μL～50μL，將濃縮的收集流與5mL～10mL顯色液溶解制得膽固醇分析樣品；所述的顯色液是重量/體積比例為鄰苯二胺（g）：冰乙酸（L）=0.03g/L～0.06g/L的溶液。

2.油脂中膽固醇含量的測定方法，包括如下步驟：

（1）溶解：將油脂充分混勻后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，渦旋混勻后得到油脂溶液；

（2）萃取：將油脂溶液加入硅膠固相萃取小柱，從該小柱的底部孔棄去流出液；再用體積比為正己烷:乙醚=98:2的淋洗液5mL～10mL加入到硅膠固相萃取小柱中，從該小柱的底部孔棄去流出液；最后用體積比為正己烷:乙醚=92:8的淋洗液20mL～50mL加入到硅膠固相萃取小柱中，從該小柱的底部孔收集流出液備用；

（3）濃縮并作色：將上述（2）步驟的備用收集流改于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀干燥，轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在真空度300KPa～500KPa，溫度為40℃～50℃條件下將所述的收集流濃縮至10μL～50μL，將濃縮的收集流與5mL～10mL顯色液溶解制得膽固醇分析樣品；所述的顯色液是重量/體積比為鄰苯二胺（g）：冰乙酸（L）=0.03g/L～0.06g/L的溶液；膽固醇分析樣品作為下述流動注射自動分析儀測定中的試樣S；

（4）測基線：將流動注射自動分析儀設(shè)置在進樣狀態(tài)，進樣閥V設(shè)置在分析狀態(tài)；在低壓泵P的作用下，反應(yīng)液R經(jīng)顯色液流路，推動液C經(jīng)推動液流路后，使反應(yīng)液R和推動液C在三通混合器M相混合形成混合液，反應(yīng)液R和推動液C的混合液經(jīng)冷卻反應(yīng)器L進入光學(xué)流通池F，經(jīng)光學(xué)檢測器D將反應(yīng)混合液特征的信號傳輸給計算機處理系統(tǒng)PC處理，得到基線；在基線測繪的同時，使試樣S經(jīng)樣品流路和進樣閥V進入進樣環(huán)C₀并將進樣環(huán)充滿；?

（5）測試樣：將流動注射自動分析儀轉(zhuǎn)換至分析狀態(tài)，使進樣環(huán)C₀中的試樣S在推動液C的推動下進入分析流路，使試樣S進入分析流路；在分析流路中，試樣S與反應(yīng)液R在三通混合器M混合后，在冷卻反應(yīng)器L中發(fā)生反應(yīng)，在此過程中形成有色物質(zhì)，繼而該有色物質(zhì)進入光學(xué)流通池F，經(jīng)光學(xué)檢測器D將該有色物質(zhì)特征的信號傳輸給計算機處理系統(tǒng)PC處理，得到試樣譜圖。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油脂中膽固醇含量的測定方法，其特征在于，所述的硅膠固相萃取小柱型號為DIKMA?ProElut?SI，在6mL的試管中有?500mg固體硅膠粉；所述的冷卻反應(yīng)器L是內(nèi)徑為1.0mm聚四氟乙烯螺旋狀盤管，冷卻方式為循環(huán)水冷卻；所述的反壓圈Y為內(nèi)徑為0.5mm聚四氟乙烯螺旋狀盤管，光學(xué)檢測器D的檢測波長為412nm。