[發明專利]分型診斷口蹄疫病毒的引物、探針及其試劑盒和使用方法

無效

• 申請號: 201310220173.X
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103667520A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 鄒明強;薛強;孫芳芳
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一套用于分型診斷口蹄疫病毒的引物及探針，其特征在于，所述引物針對各血清型口蹄疫病毒的保守片段設計，O型、AsiaI型、A型、C型四種口蹄疫病毒共用一條通用上游引物(SEQ?No.1)、SAT1型、SAT2型、SAT3型三種口蹄疫病毒共用一條通用上游引物(SEQNo.2)，O型、AsiaI型、A型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型七種口蹄疫病毒共用一條通用下游引物(SEQ?No.3)，引物5’端均以生物素標記，其核苷酸序列為：

所述探針針對各血清型口蹄疫病毒的型特異性片段設計，探針5’端均加有10個T尾，其核苷酸序列為：

所述引物和探針可用于O型或者AsiaI型或者A型或者C型或者SAT1型或者SAT2型或者SAT3型的口蹄疫病毒或者其中的兩種或者三種或者四種或者五種或者六種或者七種血清型口蹄疫病毒的聚合酶鏈式反應-反向斑點雜交分型診斷。

2.一種用于分型診斷口蹄疫病毒的試劑盒，其特征在于，包括O型、AsiaI型、A型、C型四種口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM1)，SAT1型、SAT2型、SAT3型三種口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM2)，固定有各血清型口蹄疫病毒探針的尼龍雜交膜(chip)，室溫雜交液(Hyb)，洗液I(W1)，洗液II(W2)，堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素(AP)，堿性磷酸酶緩沖液(Bufferl)，顯色底物(NBT/BCIP)，顯色緩沖液(Buffer2)和聚合酶鏈式反應預混合液(RM)，其特征在于，所述試劑盒可以進行O型或者AsiaI型或者A型或者C型或者SAT1型或者SAT2型或者SAT3型口蹄疫病毒或者其中的兩種或者三種或者四種或者五種或者六種或者七種血清型口蹄疫病毒的分型診斷。

所述的O型、AsiaI型、A型和C型四種口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM1)，其特征在于，是由如權利要求1所述的上引物(SEQ?No.1)與下引物(SEQ?No.3)按照1∶1的比例配制而成的，引物濃度為10μmol/L；所述的SAT1型、SAT2型和SAT3型三種口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM2)，其特征在于，是由如權利要求1所述的上游引物(SEQ?No.2)與下引物(SEQ?No.3)按照1∶1的比例配制而成的，引物濃度為10μmol/L；所述的固定有各血清型口蹄疫病毒探針的尼龍雜交膜(chip)，其特征在于，固定有如權利要求1所述的七種分型診斷口蹄疫病毒探針(SEQ?No.4、SEQ?No.5、SEQ?No.6、SEQ?No.7、SEQ?No.8、SEQ?No.9、SEQ?No.10)中至少一種探針，同時設置帶生物素標記的核苷酸序列為陽性對照，設置DEPC水為陰性對照，各血清型口蹄疫病毒探針的點樣濃度為50-100μmol/L，優選濃度為100μmol/L，點樣量為0.5μL。所述的室溫雜交液(Hyb)，包括3mL的20×SSPE、100μL的20％SDS和一定量的甲酰胺，并用水補足至20mL，其特征在于，甲酰胺的用量為3-6mL，其優選用量為5mL。