[發明專利]一種家蠶抗菌肽attacin2及其異源表達和應用

在審

• 申請號: 201310220040.2
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN104212805A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 李翼;李智;梁杏媚;藍希鉗;劉璇
• 申請（專利權）人: 香港理工大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C07K14/435;A61K38/17;A61P31/04;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 郭偉剛

1.一種家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的堿基序列如SEQ?ID?No:1所示。

2.根據權利要求1所述的家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因，其特征在于，對所述編碼基因進行PCR擴增使用的引物序列為：

attacin2-28a-F：5’-CAT?GCC?ATG?GGC?CAA?GCC?GGC?AGC?TTC?ACA?GT-3’

attacin2-28a-R：5’-CCG?CTC?GAG?TTA?ATG?ATG?ATG?ATG?ATG?ATG?GAA?GAA?TTT?AGA?GAA?GGA?GA-3’。

3.一種家蠶抗菌肽attacin2的重組載體，其特征在于，所述重組載體包含如SEQ?ID?No:1所示的家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因。

4.一種含有重組載體的BL21菌株，其特征在于，所述重組載體包含如SEQ?ID?No:1所示的家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因。

5.一種家蠶抗菌肽attacin2，其特征在于，具有如SEQ?ID?No:4所示的氨基酸序列。

6.根據權利要求5所述的家蠶抗菌肽attacin2，其特征在于，所述家蠶抗菌肽attacin2為成熟肽，所述成熟肽的家蠶抗菌肽attacin2的N端包含6個組氨酸構成的檢測標簽。

7.一種家蠶抗菌肽attacin2的生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

獲取家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因；

構建重組載體：將家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因的PCR擴增產物連接到pMD18-T克隆載體中，構建得到重組質粒pMD18-attacin2；分別酶切重組質粒pMD18-attacin2和原核表達載體pET28a，構建得到包含家蠶抗菌肽attacin2的編碼基因的重組載體pET28a-attacin2；

表達家蠶抗菌肽attacin2：將重組載體pET28a-attacin2轉化至BL21菌株中，利用IPTG誘導后收集包含家蠶抗菌肽attacin2的菌液。

8.根據權利要求7所述的家蠶抗菌肽attacin2的生產方法，其特征在于，所述方法還包括：

破碎BL21菌株，采用尿素溶液處理離心破碎后的細胞菌液，隨后離心并收集沉淀，獲得的上清加樣于組氨酸蛋白純化柱上，洗脫后獲得純化的家蠶抗菌肽attacin2；

以及純化的家蠶抗菌肽attacin2經PBS透析復性，并經冷凍干燥制得粉末態的所述家蠶抗菌肽attacin2。

9.一種家蠶抗菌肽attacin2在抑制黑胸敗血病菌、粘質沙雷氏菌、大腸桿菌和金黃葡萄球菌的生長中的應用。