[發(fā)明專(zhuān)利]一種高效快速的富集分離副溶血性弧菌方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310219540.4 | 申請(qǐng)日： | 2013-06-05 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103305441A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-09-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 徐鋒;魏華;許恒毅 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 南昌大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20;C12R1/63 |
| 代理公司： | 南昌新天下專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 36115 | 代理人： | 施秀瑾 |
| 地址： | 330031 江西省*** | 國(guó)省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 快速 富集 分離 溶血 弧菌 方法 | ||
1.一種高效快速的富集分離副溶血性弧菌方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）每取1?mg樹(shù)狀超支聚合物溶解于2?mL?0.02?M，pH?6.5磷酸緩沖液PBS，加入0.6?mg?N-羥基丁二酰亞胺NHSS，0.4?mg?乙基3-（3-二甲氨基）碳二亞胺鹽酸鹽EDC，室溫置于混勻儀上攪拌，活化15?min；加入2.68?mg副溶血性弧菌特異性抗體，室溫置于混勻儀上攪拌30?min；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結(jié)束將得到的溶液冷凍干燥得樹(shù)狀超支聚合物-抗體復(fù)合物；（2）取15?mg?長(zhǎng)鏈生物素，3.6?mgN-羥基丁二酰亞胺NHSS，2.4?mg乙基3-（3-二甲氨基）碳二亞胺鹽酸鹽EDC溶解于2?mL?0.02?M?pH?6.5?PBS緩沖液中；加入2.24?mg樹(shù)狀超支聚合物-抗體復(fù)合物，室溫置于混勻儀上攪拌30?min；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結(jié)束將得到的溶液冷凍干燥得長(zhǎng)鏈生物素-樹(shù)狀超支聚合物-抗體復(fù)合物；（3）取1?mL待測(cè)樣品溶液，加入0.1?mg副溶血性弧菌抗體和長(zhǎng)鏈生物素共修飾的樹(shù)狀超支聚合物即長(zhǎng)鏈生物素-樹(shù)狀超支聚合物-抗體復(fù)合物，置于混勻儀上，以30?rpm的轉(zhuǎn)速室溫孵育15?min；加入0.1?mg修飾有鏈霉親和素的納米磁珠，置于混勻儀上，以30?rpm的轉(zhuǎn)速室溫孵育15?min，常規(guī)磁力架分離3?min；（4）磁力分離后，用0.1%?PBST?(0.1%?Tween?20)洗滌后，用PBS緩沖液重懸即得捕獲有副溶血性弧菌的納米磁珠-鏈霉親和素-長(zhǎng)鏈生物素-樹(shù)狀超支聚合物-抗體-副溶血性弧菌抗原復(fù)合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述樹(shù)狀超支聚合物為為氨基化的樹(shù)枝狀化聚酰胺-胺，其分子量為56000?Da。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述納米磁珠粒徑為20-50nm，優(yōu)選為30?nm。
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