[發明專利]摻假蜂蜜中寡糖的快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310219463.2
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN104215704A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 徐錦忠;吳斌;張曉燕;劉秀紅;丁濤;張睿;楊波
• 申請（專利權）人: 江蘇中譜檢測有限公司;江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于食品檢測技術領域，特別涉及一種摻假蜂蜜中寡糖的快速檢測方法。

背景技術

純正天然的蜂蜜主要由單糖，包括葡萄糖和果糖組成，同時還含有較少量的二糖和三糖。真正的蜂蜜是由昆蟲蜜蜂從開花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中釀制的蜜，從釀造到采蜜過程中禁止任何人為的添加活性成分或者蜂蜜中的花粉等顆粒物質。然而，一些不法商人為了牟取更高的利潤往往會往蜂蜜中加入與蜂蜜主要成分類似的轉化糖漿，如甜菜糖漿、大米糖漿、木薯糖漿、菊苣糖漿等。過去針對蜂蜜的摻雜造假的檢測方法有碳同位素方法(C4植物糖)，薄層色譜法(TLC)，呋喃果糖苷酶法(BFF法)，歐洲同位素方法(LC-IRMS)方法，但這些方法都是國外人提出，而且經過一段時間后，這些方法也不能適應新環境的需要。我們通過通過大量的研究發現這些摻入蜂蜜中的糖漿中含有少量的寡糖(包括五糖，六糖和七糖)，而純正天然的蜂蜜中含有寡糖的量卻遠遠低于糖漿中的量。因此，通過檢測蜂蜜中寡糖的含量是判別蜂蜜是否摻入糖漿的準確方法之一。

發明內容

本發明的目的在于針對目前市場上存在的摻假蜂蜜，提出一種選擇性好、靈敏度高、操作簡單的摻假蜂蜜中寡糖的快速定性、定量檢測方法。

為了實現上述發明目的，本發明公開了一種摻假蜂蜜中寡糖的快速檢測方法，其特征主要包括以下步驟：

第一步：方法的前處理；

第二步：液相色譜分離；

第三步：質譜檢測。

該方法以質荷比為851.3、1013.5和1175.5m/z的離子峰分別為寡糖中五糖、六糖和七糖的特征檢測峰的HPLC-MS/MS檢測方法。分別通過作五糖、六糖和七糖的標準曲線來對摻假蜂蜜中五糖、六糖和七糖的含量進行精確定量。

針對本發明步驟一，公開了一種已經進行優化的前處理步驟：準確稱量1.0(±0.01)g樣品于50ml樣品管中，加入5.0ml水，渦旋至完全溶解，取200μl加入樣品瓶中，再加入800μl7∶3乙腈∶水定容至1ml，渦旋混勻，過水相濾膜后進樣。

針對本發明步驟二，還公開了一種已經優選的液相分離條件：色譜柱選用proteomix?WAX-NP5(2.1×100mm，5μm)；柱溫為35℃；流動相為A.乙腈-B.0.1％甲酸水溶液，流速為0.25ml/min；采用梯度洗脫的方式，以體積百分比計，0～1min，A：80％、B：20％；1～4min，A：80％～30％，B：20％～70％；4～5min，A：30％，B：70％；5～5.1min，A：30％～80％，B：70％～20％；5.1～6.5min，A：80％，B：20％；所述的液相分離采用在線閥切換技術。

最后，針對本發明步驟三，公開了已經優化好的質譜檢測方法：采用電噴霧離子源(ESI)；毛細管電壓：3.5KV；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流量(氮氣)：5L/min；鞘氣溫度：400℃；霧化器壓力：50psig的條件下，進行正離子SRM掃描。五糖的檢測母離子為851.3，子離子包括365.4、527.4、689.3、851.3；六糖的檢測母離子為1013.5，子離子包括689.3，851.3，1013.5；七糖的檢測母離子為1175.5，子離子包括689.3，851.3，1013.5，1175.5.

本發明的方法優點在于：操作簡單，選擇性高，靈敏度高，樣品溶液經過液相色譜串聯質譜多反應監測選擇離子分析，采用外標法可以對摻假蜂蜜中寡糖的含量進行精確定性定量，回收率在95～105％范圍內。

附圖說明

圖1為天然純正江蘇油菜蜂蜜檢測樣品檢測結果圖譜。

圖2為摻入糖漿樣品檢測結果圖譜。

圖3為陽性樣品的六糖與七糖的峰面積響應值與離子豐度比圖譜。

圖4為假陽性樣品的六糖與七糖的峰面積響應值與離子豐度比圖譜。

具體實施方式

1.前處理：準確稱量1.0(±0.01)g樣品于50ml樣品管中，加入5.0ml水，渦旋至完全溶解，取200μl加入樣品瓶中，再加入800μl7∶3乙腈∶水定容至1ml，渦旋混勻，過水相濾膜后進樣。

2.五糖、六糖和七糖的標準品溶液的配制：分別精確稱量0.025g五糖、六糖和七糖標準品，用超純水定容于25mL容量瓶中，得到1mg/ml標準溶液，再稀釋到1μg/ml標準溶液。最后稀釋得到六個標準點：5ppb、10ppb、20ppb、50ppb、100ppb、200ppb，分別得到五糖、六糖和七糖標準曲線。