[發明專利]志賀氏菌在復雜基質中磁富集分離方法

有效

• 申請號: 201310219457.7
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103308680A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 賴衛華;山珊;劉道峰;徐超蓮;陳明慧
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.志賀氏菌在復雜基質中磁富集分離方法，其特征在于包括以下步驟：（1）每取1?mg超支化聚合物溶解于2?mL?0.02?M，pH?6.5磷酸緩沖液PBS，加入0.6?mg?N-羥基丁二酰亞胺NHSS，0.4?mg?乙基3-（3-二甲氨基）碳二亞胺鹽酸鹽EDC，室溫置于混勻儀上攪拌，活化15?min；加入18.75?mg志賀氏菌特異性抗體，室溫置于混勻儀上攪拌30?min；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結束將得到的溶液冷凍干燥得超支化聚合物-抗體復合物；（2）取15?mg?長鏈生物素，3.6?mg?NHSS，2.4?mg?EDC溶解于2?mL?0.02?M?pH?6.5?PBS緩沖液中；加入0.33?mg超支化聚合物-抗體復合物加入到上述溶液中，室溫置于混勻儀上攪拌30?min；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結束將得到的溶液冷凍干燥得長鏈生物素-超支化聚合物-抗體復合物；（3）取1mL?待測樣品溶液，加入0.1?mg志賀氏菌抗體和長鏈生物素共修飾的超支化聚合物即步驟（2）長鏈生物素-超支化聚合物-抗體復合物，置于混勻儀上，以30?rpm的轉速室溫孵育15?min；加入0.1?mg修飾有鏈霉親和素的納米磁珠，置于混勻儀上，以30?rpm的轉速再室溫孵育15?min，常規磁力架分離3?min；（4）磁力分離后，0.1%?PBST洗滌后，用PBS緩沖液重懸即得捕獲有志賀氏菌的納米磁珠-鏈霉親和素-長鏈生物素-超支化聚合物-抗體-志賀氏菌抗原復合物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述超支化聚合物為氨基化的超支化聚酰胺-胺，其分子量為8000?Da。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述納米磁珠粒徑為20-50nm，優選為30?nm。