[發(fā)明專利]一種富集分離幽門螺桿菌的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310219396.4
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103275902A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏華
• 申請（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;G01N33/569;C12R1/01
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種富集分離幽門螺桿菌HP的方法，其特征在于包括以下步驟：(1)?每稱取4.5?mg樹狀超支聚合物，溶解于4?mL磷酸緩沖液（PBS，0.01?mol/L，pH?8.0）中，攪拌滴加25%的戊二醛水溶液545?μL，使戊二醛的終濃度為3%;在搖床150?r/min的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)3.5?h；滴加12?mg幽門螺桿菌HP特異性抗體，使其終濃度達(dá)到3?mg/mL左右，搖床150?r/min?的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)24?h；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結(jié)束將得到的溶液冷凍干燥得樹狀超支聚合物-抗體復(fù)合物；（2）取15?mg?長鏈生物素，溶解于4?mL?0.01?mol/L?pH?8.0?PBS磷酸緩沖液中，攪拌滴加25%的戊二醛水溶液545?μL，使戊二醛的終濃度為3%;在搖床150?r/min的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)3.5?h；加入0.55?mg樹狀超支聚合物-抗體復(fù)合物，在搖床150?r/min的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)24?h；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結(jié)束將得到的溶液冷凍干燥得長鏈生物素-樹狀超支聚合物-抗體復(fù)合物；（3）取1?mL待測樣品溶液，加入0.1?mg?HP抗體和長鏈生物素共修飾的樹狀超支聚合物即步驟（2）長鏈生物素-樹狀超支聚合物-抗體復(fù)合物，置于混勻儀上，以30?rpm的轉(zhuǎn)速室溫孵育15?min；加入0.1?mg修飾有鏈霉親和素的納米磁珠，置于混勻儀上，以30?rpm的轉(zhuǎn)速室溫孵育15?min，插入常規(guī)磁力架分離3?min；（4）磁力分離后，用0.1%?PBST洗滌后，用PBS緩沖液重懸即得捕獲有幽門螺桿菌的納米磁珠-鏈霉親和素-長鏈生物素-樹狀超支聚合物-抗體-HP抗原復(fù)合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述樹狀超支聚合物為氨基化的樹枝狀化聚酰胺-胺，其分子量為56000?Da。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述納米磁珠粒徑為20-50nm，優(yōu)選為30?nm。