[發明專利]PRRSV基因標記疫苗株ELISA鑒別診斷試劑盒及方法和應用有效
| 申請號： | 201310217805.7 | 申請日： | 2013-06-03 |
| 公開（公告）號： | CN104165997A | 公開（公告）日： | 2014-11-26 |
| 發明（設計）人： | 童光志;周艷君;孫晶;姜一峰;童武 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院上海獸醫研究所 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/569 |
| 代理公司： | 上海序倫律師事務所 31276 | 代理人： | 周東萍 |
| 地址： | 200241 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | prrsv 基因 標記 疫苗 elisa 鑒別 診斷 試劑盒 方法 應用 | ||
1.一種PRRSV基因標記疫苗株ELISA鑒別診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含NP49多肽抗原，該NP49多肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含ELISA酶標板、封閉液、血清稀釋液、酶標二抗、顯示液、終止液、標準陽性血清、標準陰性血清。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述NP49多肽抗原的包被濃度為500ng/孔。
4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬抗體，其稀釋度為1∶10000。
5.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述標準陽性血清是用重組NDV?NP49抗原蛋白免疫豬而制得。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述重組NDV?NP49抗原蛋白由包含NP49多肽編碼基因的重組表達載體經誘導表達、純化后制得。
7.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述封閉液和血清稀釋液為2％重量濃度的牛血清白蛋白。
8.一種非診斷目的的PRRSV基因標記疫苗株ELISA鑒別方法，其特征在于，包括以下步驟：
用NP49多肽抗原包被ELISA酶標板；
將待測血清與包被抗原作用后，依次加入酶標二抗、顯色液和終止液；
利用酶標儀讀取吸光度值OD450nm，并按公式：S/P＝(待測血清樣品OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)，計算待測血清樣品的S/P值；
待測血清樣品S/P值≥臨界值的判為陽性，S/P值＜臨界值的判為陰性，所述臨界值是通過ROC統計學分析方法獲得的當靈敏度和特異度數值之和最大時對應的S/P值。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述待測血清的稀釋度為1∶40。
10.權利要求1所述試劑盒在制備鑒別診斷PRRS基因工程標記疫苗免疫豬的產品中的應用。
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