[發明專利]一種優化的人乳頭瘤病毒31型L1蛋白的基因序列

有效

• 申請號: 201310217596.6
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN104212818B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 李少偉;魏旻希;范飛;王大寧;潘暉榕;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權）人: 廈門大學;廈門萬泰滄海生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/37
• 分類號: C12N15/37;C12N15/70;C12N1/21;C12N7/04;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 李程達

1.編碼人乳頭瘤病毒31型L1蛋白的分離的核酸，其特征在于，所述分離的核酸以TAG為終止密碼子；優選地，所述核酸的核苷酸序列針對在大腸桿菌中的表達進行了優化；更優選地，所述核酸的核酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

2.包含權利要求1的分離的核酸的載體。

3.包含權利要求2的載體的宿主細胞，優選為原核宿主細胞，更優選為大腸桿菌細胞。

4.一種HPV31病毒樣顆粒，其含有權利要求1的分離的核酸編碼的蛋白，或者由權利要求1的分離的核酸編碼的蛋白組成。

5.一種組合物，其包含權利要求1的分離的核酸，或權利要求1的分離的核酸編碼的蛋白，或權利要求2的載體，或權利要求3的宿主細胞，或權利要求4的HPV31病毒樣顆粒。

6.一種藥物組合物或疫苗，其包含權利要求4的HPV31病毒樣顆粒，任選地還包含藥學可接受的載體和/或賦形劑，

優選地，所述HPV31病毒樣顆粒以預防HPV感染或宮頸癌有效量存在；

優選地，所述藥物組合物或疫苗還包含至少一種選自下列的病毒樣顆粒：HPV6L1蛋白病毒樣顆粒，HPV11L1蛋白病毒樣顆粒，HPV16L1蛋白病毒樣顆粒，HPV18L1蛋白病毒樣顆粒，HPV45L1蛋白病毒樣顆粒，HPV33L1蛋白病毒樣顆粒，HPV52L1蛋白病毒樣顆粒和HPV58L1蛋白病毒樣顆粒。

7.制備HPV31L1蛋白的方法，其包括利用原核表達系統表達編碼HPV31L1蛋白的分離的核酸，所述分離的核酸以TAG為終止密碼子；然后將含有該蛋白的裂解上清進行純化處理，

優選地，所述方法包括步驟：

a)在大腸桿菌中表達編碼HPV31L1蛋白的分離的核酸，

b)將表達HPV31L1蛋白的大腸桿菌在鹽濃度為100mM-600mM的溶液中破碎，分離得到上清液，加入還原劑，優選地，所述還原劑為DTT或2－巰基乙醇，其用量為10mM-100mM，

c)將獲得的HPV31L1蛋白通過色譜層析進行純化；

優選地，所述原核表達為大腸桿菌表達系統。

8.制備權利要求4的HPV31病毒樣顆粒的方法，其包括步驟：

將根據權利要求7的方法制備的HPV31L1蛋白去除還原劑。

9.一種制備疫苗的方法，其包括將權利要求4的HPV31病毒樣顆?；蛲ㄟ^權利要求8的方法獲得的HPV31病毒樣顆粒與藥學可接受的載體和/或賦形劑混合，任選地還混合一種或多種選自HPV6，11，16，18，45，33，52和58的HPV型別的病毒樣顆粒。

10.權利要求1的分離的核酸編碼的HPV31L1蛋白，或權利要求4的HPV31病毒樣顆粒，或通過權利要求7的方法制備的HPV31L1蛋白，或通過權利要求8的方法制備的HPV31病毒樣顆粒在制備藥物組合物或疫苗中的用途，所述藥物組合物或疫苗用于預防HPV感染或由HPV感染所導致的疾病，

優選地，所述HPV感染是HPV31感染；

優選地，所述由HPV感染所導致的疾病是宮頸癌。