[發明專利]一種優化的人乳頭瘤病毒31型L1蛋白的基因序列

有效

• 申請號: 201310217596.6
• 申請日: 2013-06-04
• 公開（公告）號: CN104212818B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 李少偉;魏旻希;范飛;王大寧;潘暉榕;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權）人: 廈門大學;廈門萬泰滄海生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/37
• 分類號: C12N15/37;C12N15/70;C12N1/21;C12N7/04;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 李程達

技術領域

本發明涉及分子病毒學和免疫學領域。具體地，本發明涉及一種終止密碼子為TAG的編碼人乳頭瘤病毒31型L1蛋白的基因序列，其編碼的蛋白和制備方法，以及包含其編碼的蛋白的病毒樣顆粒（Virus-Like?Particle，VLP），所述蛋白和病毒樣顆粒可用于預防HPV（特別是HPV31）感染及由HPV（特別是HPV31）感染所導致的疾病例如宮頸癌等。本發明還涉及上述蛋白和病毒樣顆粒用于制備藥物組合物或疫苗的用途，所述藥物組合物或疫苗用于預防HPV（特別是HPV31）感染及由HPV（特別是HPV31）感染所導致的疾病例如宮頸癌等。?

背景技術

人乳頭瘤病毒(Human?Papillomavirus，HPV)是一種無包膜DNA病毒。其病毒顆粒直徑為45～55nm，病毒衣殼呈20面體對稱，有72個殼微粒，由病毒的主要衣殼蛋白L1及次要衣殼蛋白L2組成。?

目前已知的HPV約有90多種亞型，在人群中主要引起皮膚，粘膜的各類良性及惡性病變。HPV分子流行病學調查證實，高危型HPV感染是宮頸癌發生的重要啟動因子。在所有宮頸癌標本中，HPV?DNA檢出率高達80％以上。宮頸癌是一種常見的女性惡性腫瘤，其發病率僅次于乳腺癌，嚴重威脅著女性的健康。據統計，每年世界范圍內約有490,000例的新發病例，約有270,000人死于該疾病（Boyle，P.，and?J.Ferlay.Ann?Oncol2005，16:481-8）。在所有宮頸癌病例中，發生于發展中國家的占了約83％，在這些國家中，宮頸癌甚至能夠占到女性惡性腫瘤的15％。撒哈拉以南地區，中南亞，拉丁美洲，東亞?均為宮頸癌的高發區。我國也屬于宮頸癌高發區。在陜西略陽縣，已婚婦女中宮頸癌的發病率高達1026/100000。?

有關世界范圍內宮頸癌標本中HPV型別分布的薈萃分析發現，宮頸癌中最常見的15種HPV高危型別中，HPV31在HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV45之后，位于第6位；而且在宮頸癌高發的非洲南部和中美洲地區，HPV31甚至位居引起宮頸癌的HPV型別的第三位（Clifford?GM，Smith?JS，Plummer?M，et?a1．Br?J?Cancer，2003，88(1)：63-73）。這說明HPV31在世界范圍內的婦女宮頸癌患者中的感染率較高，是普遍易感染的HPV型別之一。?

目前已上市的HPV疫苗為Merck的及GSK的?，上述兩種疫苗分別含有HPV6/11/16/18及HPV16/18VLP，但均不包含在中國及亞洲婦女中普遍易感的HPV31型別VLP，也無法提供針對HPV31型別的感染與致病提供保護。?

因此，針對中國以及亞洲等發展中國家婦女安全有效的HPV疫苗，特別是針對HPV16，18及31等高危型別的疫苗，是有效預防宮頸癌，改善廣大婦女（特別是我國及亞洲婦女）健康狀況的有效途徑。?

HPV?L1蛋白為主要衣殼蛋白，分子量為55-60kDa，是HPV疫苗主要候選免疫抗原。在多種表達系統中表達的HPV?L1蛋白無需L2蛋白輔助即可形成在形態結構上與天然病毒顆粒相似的病毒樣顆粒。該病毒樣顆粒為二十面體立體對稱結構，由72個L1蛋白的五聚體組成。其保留了病毒顆粒的天然表位，具有較強的免疫原性，可誘導針對同型HPV病毒的中和抗體(Kirnbauer，R.，F.Booy，et?al.1992Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A89(24):12180-4)。并且，病毒樣顆粒不帶有病毒核酸，無潛在致癌危險，具有良好的安全性。因此，VLP疫苗已成為HPV疫苗發展的主要方向。?

HPV?VLP疫苗研制的關鍵是能夠大量高效制備高純度的VLP樣品。目前較為常用的VLP表達系統可以分為真核表達系統及原核表達?系統。?

常用的真核表達系統有痘病毒表達系統、昆蟲桿狀病毒表達系統、酵母表達系統。在真核表達系統中所表達的HPV?L1蛋白天然構象破壞少，能自發形成VLP，往往只需進行簡單的密度梯度離心即可得到純化的VLP，為純化工作提供極大的便利。但是由于真核表達系統的表達量低，培養成本高，給大規模工業化生產帶來了極大困難。目前已上市的HPV疫苗采用了釀酒酵母表達系統，其表達量低，生產成本高，因此該產品價位偏高，影響其廣泛應用。?