[發明專利]一種血漿中功能性蛋白質的分離純化方法

有效

• 申請號: 201310216023.1
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN103288953A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 董悅生;李玲玲;于芳;修志龍
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K16/06;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/14
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

1.一種血漿中功能性蛋白質的分離純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）向血漿溶液中添加可溶性無機鹽Ⅰ和親水性有機溶劑，攪拌均勻，形成雙水相萃取體系，靜置后，收集上相萃取液；

（2）步驟（1）的上相萃取液經蒸餾回收溶劑后，過Phenyl?Sepharose6FF^TM疏水層析柱，先用平衡液Ⅰ洗脫至無蛋白流出，再用洗脫液Ⅰ梯度洗脫，收集功能性血漿蛋白餾分；

（3）步驟（2）的功能性血漿蛋白餾分經透析得蛋白樣品溶液，過Q?Sephrose?FF或DEAE?Sephrose?FF離子交換層析柱，先用平衡液Ⅱ洗脫至無蛋白流出，再用洗脫液Ⅱ梯度洗脫，得高純度血漿功能性蛋白；

其中所述可溶性無機鹽Ⅰ為磷酸鹽、碳酸鹽、硫酸鹽、鹵化物、檸檬酸鹽中的一種或兩種以上的混合物；所述親水性有機溶劑為乙醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、異丁醇、乙二醇或丙酮中的一種；所述平衡液Ⅰ含有0.2～3mol/L可溶性無機鹽Ⅱ和5～50mmol/L緩沖液；所述洗脫液Ⅰ含有0～1mol/L可溶性無機鹽Ⅱ和5～50mmol/L緩沖液；所述平衡液Ⅱ含有5～50mmol/L緩沖液；所述洗脫液Ⅱ含有0～1mol/L可溶性無機鹽Ⅱ和5～50mmol/L緩沖液；所述可溶性無機鹽Ⅱ為磷酸氫二鉀、檸檬酸鈉、氯化鈉中的一種或兩種以上的混合物；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液中的一種。

2.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（1）中所述可溶性無機鹽Ⅰ占雙水相體系質量的1%～45%，親水性有機溶劑占雙水相體系質量的3%～50%。

3.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（1）中所述可溶性無機鹽Ⅰ為磷酸氫二鉀、磷酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、氯化鈉、硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀中的一種或兩種以上的混合物。

4.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（1）中所述靜置的時間為0.5～36小時；雙水相體系的溫度為0～37℃；雙水相體系的pH值為3～13。

5.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（2）所述蒸餾的溫度為20～45℃，蒸餾至有機溶劑含量低于20%。

6.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（2）中所述回收有機溶劑的上相萃取液，加入可溶性無機鹽Ⅱ，其在萃取液中的終濃度為0.3～4.0mol/L，調pH至5.5～9.0。

7.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（2）中所述平衡液Ⅰ或洗脫液Ⅰ的pH值均為5.5～9.0。

8.根據權利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟（3）中所述平衡液Ⅱ或洗脫液Ⅱ的pH值均為5.5～9.0。

9.一種如權利要求1-8的任一項所述的方法制備得到的功能性血漿蛋白。

10.根據權利要求9所述的功能性血漿蛋白為白蛋白或免疫球蛋白。