[發明專利]一種家蠶質型多角體病毒RT-LAMP檢測用引物組及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310215962.4
• 申請日: 2013-06-03
• 公開（公告）號: CN103397104A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 劉吉平;楊吉龍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明屬于分子診斷和鑒定技術領域，具體涉及一種家蠶質型多角體病毒RT-LAMP檢測用引物組及檢測試劑盒。?

背景技術

家蠶質型多角體病又稱家蠶中腸型膿病，病原為家蠶質型多角體病毒（Bombyx?mori?cytoplasmic?polyhedrosis?virus,?簡稱BmCPV），是呼腸孤病毒科質多角體病毒屬的模式種。BmCPV病毒粒子呈正二十面體，具有獨特的單層衣殼結構，其基因組由10節段雙鏈RNA構成。目前根據其多角體的形狀和在細胞內形成的部位分為9個株系，其中BmCPV-I株的dsRNA基因全序列已被測定。BmCPV通過家蠶食下感染，侵染家蠶中腸上皮細胞使其主要細胞器均發生病變。致病后的病蠶發育緩慢，體軀瘦小，行動呆滯，體色略帶乳白，常排出帶乳白色的軟糞，而后相繼死亡，導致蠶繭減產甚至顆粒無收，對蠶桑生產造成巨大的威脅。?

目前家蠶質型多角體病主要通過典型病癥來進行診斷。該病的外部病癥與病毒性軟化病及細菌性胃腸病有極為相似之處，但解剖其中腸，可見乳白色隆起，并可檢出大量的多角體，這為診斷該病的重要依據之一。但對其分子生物學檢測方法報道較少。經對現有發明專利檢索發現，劉吉平等（申請公布號CN102154522A，專利號ZL201110085935.0，2011年）、潘中華等（申請公布號CN102925590A，申請號201210452774.9，2012年）分別采用常規PCR方法檢測BmCPV；吳萍等（申請公布號CN102559929A，申請號201210004704.7，2012年）采用熒光定量PCR法檢測BmCPV。上述方法操作繁瑣，需要專門PCR儀器，難以在生產實踐中推廣應用。?

環介導等溫擴增法（Loop-mediated?isothermal?amplification，LAMP）是日本學者Notomi等（2000）發明的一種新型體外等溫擴增特異核酸判斷的技術，具有特異性強、敏感性高，快速、高效，操作簡便等優點，肉眼即可判斷結果，不需要特殊儀器，從而簡化了檢測過程，檢測時間也大大縮短，適宜于現場快速檢測和診斷。隨著LAMP技術的發展，該技術已成功應用于人類和動植物病毒、細菌以及寄生蟲等引起的疾病診斷和快速檢測（楊麗，何曉青，韋玉梅等.?環介導等溫擴增技術(LAMP)檢測人星狀病毒方法的建立及其在再生水檢測中的應用.生態毒理學報,2011,6(6):600-606；Diaeldin?A.?Salih?&?Awadia?M.?Ali?&?Zhijie?Liu?et?al.Development?of?a?loop-mediated?isothermal?amplification?method?for?detection?of?Theileria?lestoquardi.?Parasitol?Res.2012，(110):533-538）。目前尚未見應用LAMP法檢測家蠶質型多角體病毒的試劑盒的相關技術報道。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有家蠶質型多角體病毒檢測技術的不足，提供一種家蠶質型多角體病毒RT-LAMP檢測引物組。?

本發明的另一個目的是提供一種家蠶質型多角體病毒的RT-LAMP檢測試劑盒。依據本發明所述試劑盒可有效地檢測家蠶質型多角體病毒，為生產上早期檢測和預知檢查家蠶中腸型膿病提供了重要的技術基礎。?

??

本發明的另一個目的是提供一種家蠶質型多角體病毒的RT-LAMP試劑盒快速檢測方法。

本發明的目的通過以下技術方案予以實現：?

????一種通過環介導等溫擴增技術檢測家蠶質型多角體病毒的引物組，所述引物組包括一對內側引物CPVFI2/CPVBI2和一對外側引物CPVF2/CPVB2，CPVF2、CPVB2、CPVFI2和CPVBI2引物的序列如SEQ?ID?NO：1~4所示。

????一種家蠶質型多角體病毒RT-LAMP檢測試劑盒，包括一對內側引物CPVFI2/CPVBI2和一對外側引物CPVF2/CPVB2，CPVF2、CPVB2、CPVFI2和CPVBI2引物序列如SEQ?ID?NO:1~4所示。?