[發明專利]太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法

有效

• 申請號: 201310214264.2
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN103314949A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 劉清華;李軍;于道德;官曙光
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

1.一種太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：

將太平洋鱈魚精液與抗凍液以1:4-1:3的體積比例混合，混合后在0-4℃孵育平衡8-10分鐘；孵育后以分段方式降溫處理；處理后投入到液氮（-196℃），分裝保存；

所述抗凍液由稀釋液、抗凍劑、添加劑組成，其中稀釋液為：NaCl?8g/L，Na₂HPO₄·2H₂O0.6g/L，KH₂PO₄0.6g/L，海藻糖37.8g/L；抗凍劑為終濃度10%（V/V）的丙二醇（PG）；添加劑為：終濃度5%（V/V）的蛋黃和終濃度5%BSA（V/V）。

2.按權利要求1所述太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述抗凍液在使用前放置于0℃冰箱中預冷過夜，待用。

3.按權利要求1所述太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述經抗凍液混合的大菱鲆的精液置于2ml或5ml的凍存管中。

4.按權利要求1所述太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述采集處于繁殖期的太平洋鱈魚雄魚，將生殖孔微微發紅的雄魚從養殖池中撈出，放置于海綿上，蒸餾水沖洗生殖孔三次，用潔凈的紙巾擦凈，拇指與食指輕輕沿著精巢的位置從后向前擠壓，用5ml的一次性吸管采集新鮮精液魚5ml的離心管中，避光存放于0-4℃的冰盒中，取活力高于80%精液，保存待用。

5.按權利要求1所述太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述太平洋鱈魚的精液與抗凍液在碎冰中（0℃）輕輕震蕩、充分混勻3-5min，然后以-5℃/min降溫至-60℃，然后再以-10℃/min降溫至-120℃平衡3min直接投入到液氮（-196℃）中保存。

6.按權利要求1所述太平洋鱈魚精子高效超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將經液氮冷凍保存的太平洋鱈魚凍精進行解凍，將其直接放入35-40℃水浴90-120s，然后置于室溫18-20℃完全融解，而后于自然海水中激活。