[發(fā)明專(zhuān)利]一種星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310213169.0 | 申請(qǐng)日： | 2013-05-31 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103314948A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-09-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉清華;李軍;徐世宏;韓龍江 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | A01N1/02 | 分類(lèi)號(hào)： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 沈陽(yáng)科苑專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 21002 | 代理人： | 周秀梅;李穎 |
| 地址： | 266071*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 星斑川鰈 精子 超低溫 冷凍 保存 方法 | ||
1.一種星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將星斑川鰈的精液與抗凍液按體積比1:3的比例混合，在0℃孵育6-8分鐘，孵育后以分段方式降溫處理；處理后投入到液氮（-196℃），分裝保存；
所述抗凍液由稀釋液、抗凍劑和添加劑組成；其中，稀釋液為100mM蔗糖，100mM?KHCO3，25mM?NaHCO3；抗凍劑為終濃度8%的（V/V）DMSO（二甲基亞砜）和終濃度7%的（V/V）Gly（甘油）；添加劑：5mM還原型谷胱甘肽，50mM牛磺酸，10%蛋黃（V/V）。
2.按權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述抗凍液在使用前放置于0℃冰箱中預(yù)冷過(guò)夜，待用。
3.按權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述凍存管為2ml或5ml的凍存管。
4.按權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述蛋黃由雞蛋分離蛋白并攪拌均勻所得。
5.權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將混合抗凍液和精液的凍存管置于碎冰中（0℃）輕輕震蕩混勻6min，使之充分混勻，然后置于0℃平衡2min；而后以分段降溫方式處理，即以-8℃/min的降溫速率降溫至-60℃，然后再以-15℃/min的降溫速率降溫至-120℃平衡2分鐘。
6.權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述星斑川鰈的精液是采集處于繁殖期的星斑川鰈雄魚(yú)，將雄魚(yú)從養(yǎng)殖池中撈出，放置于海綿上，蒸餾水沖洗生殖孔、擦凈，輕輕擠壓腹部獲得新鮮精液，而后將活力高于85%的精液與抗凍液混合。
7.權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：將經(jīng)液氮處理分裝保存的星斑川鰈凍精進(jìn)行解凍，將其直接放入37℃水浴100s，然后置于室溫至完全融化，而后于自然海水中激活。
8.權(quán)利要求1所述的星斑川鰈精子超低溫冷凍保存方法，其特征在于：所述凍精進(jìn)行解凍直接放入37℃水浴100s，期間不斷搖動(dòng)凍存管。
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