[發明專利]一種皮卡那肽的制備方法

在審

• 申請號: 201310209459.8
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN104211777A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 宓鵬程;潘俊鋒;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

1.一種制備皮卡那肽的方法，包括以下步驟：

1）將Fmoc-Leu-OH與樹脂偶聯，得到Fmoc-Leu-樹脂，

2）按照皮卡那肽的肽序從C端到N端依次將氨基酸原料偶聯到步驟1）得到的Fmoc-Leu-樹脂上，得到肽樹脂片段H-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-Cys(X)-Glu(OtBu)-Leu-Cys(Y)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(X)-Thr(tBu)-Gly-Cys(Y)-Leu-樹脂，其中X和Y選自Trt、Acm、mmt或StBu，并且X不同于Y，

3）將步驟2）得到的肽樹脂裂解并脫除除Cys外的氨基酸的側鏈保護基，并分別脫除Cys的兩種保護基X和Y，經氧化分別形成二硫鍵（4-12）與二硫鍵（7-15），得到皮卡那肽。

2.權利要求1的方法，其中步驟1）所述的樹脂是Wang樹脂或CTC樹脂。

3.權利要求1的方法，其中步驟3）中，脫除Cys的保護基X或Y可以與裂解肽樹脂并脫除除Cys外的其他氨基酸的側鏈保護基同時進行；脫除Cys的保護基X或Y也可與氧化形成二硫鍵（4-12）或二硫鍵（7-15）同時進行；二硫鍵（4-12）和二硫鍵（7-15）的形成是分別進行的。

4.權利要求1的方法，其中步驟3）中可使用含5%TFA的裂解液，優選TFA：DCM=5：95（V/V）將肽片段從CTC樹脂上裂解下來或將側鏈保護基mmt脫除；可使用含95%TFA的裂解液，優選TFA：EDT：水=95：2.5：2.5（V/V）將肽片段從CTC樹脂或wang樹脂上裂解下來，或將側鏈保護基Trt、OtBu、tBu或mmt脫除。

5.權利要求1的方法，其中步驟3）中可使用I₂溶液，優選含300mmol/lI₂的乙醇溶液將側鏈保護基Acm脫除。

6.權利要求1的方法，其中步驟3）中可使用β-巰基乙醇溶液，優選含20%β-巰基乙醇和0.1M?N-甲基嗎啉的DMF溶液或水溶液將側鏈保護基StBu脫除。

7.權利要求1-6任一項的方法，其中步驟3）中氧化形成二硫鍵是采用空氣或氧氣氧化、DMSO氧化、I₂氧化或H₂O₂氧化的方法。

8.權利要求7的方法，其中步驟1）中所用的偶聯劑為：a)所用樹脂為wang樹脂時所用偶聯劑為HOBT/DIC/DMAP；b)所用樹脂為2-CTC樹脂時所用偶聯劑為DIPEA。

9.權利要求7的方法，其中步驟2）中所用的偶聯劑為HOBT/DIC。

10.權利要求1的方法，其中步驟1）中Fmoc-Leu-樹脂的替代度為0.25～0.55mmol/g。