[發(fā)明專利]一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的抗原及其ELISA檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310209236.1
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN103275194A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于天飛;黎明;范震宇;邵淑麗
• 申請（專利權(quán)）人: 齊齊哈爾大學(xué)
• 主分類號: C07K14/17
• 分類號: C07K14/17;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 高會會

1.一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的抗原，其特征在于所述的抗原含有spike蛋白C抗原位點(diǎn)、spike蛋白D抗原位點(diǎn)和柔性氨基酸序列；所述的spike蛋白C抗原位點(diǎn)與spike蛋白D抗原位點(diǎn)通過柔性氨基酸序列連接，所述的spike蛋白C抗原位點(diǎn)的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；spike蛋白D抗原位點(diǎn)的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示；柔性氨基酸的序列如SEQIDNO：3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的抗原，其特征在于所述的采用柔性氨基酸連接的具體操作如下：將編碼spike蛋白線性表位C和表位D的核酸序列之間插入編碼柔性氨基酸片段的核酸序列；其中，所述的spike蛋白線性表位C的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；spike蛋白線性表位D的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示；柔性氨基酸片段的核酸序列如SEQIDNO：6所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的抗原，其特征在于所述的編碼柔性氨基酸片段的核酸序列的5’端與編碼spike蛋白線性表位C核酸序列的3’端相連接，編碼柔性氨基酸片段的核酸序列的3’端與編碼spike蛋白線性表位D核酸序列的5’端相連接。

4.一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的間接ELISA檢測方法，其特征在于它包括如下步驟：

將豬血清中的氨基酸序列spike蛋白C抗原位點(diǎn)和D抗原位點(diǎn)，采用柔性氨基酸連接，得重組蛋白質(zhì)；以重組蛋白質(zhì)為抗原，采用間接ELISA方法檢測豬血清，確定豬血清中是否含有豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的ELISA檢測方法，其特征在于所述的氨基酸序列spike蛋白C抗原位點(diǎn)的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的ELISA檢測方法，其特征在于所述的氨基酸序列spike蛋白D抗原位點(diǎn)的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的ELISA檢測方法，其特征在于所述的柔性氨基酸的序列如SEQIDNO：3所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的ELISA檢測方法，其特征在于所述的抗原的包被量為0.2μg/孔。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的ELISA檢測方法，其特征在于所述的采用柔性氨基酸連接的具體操作如下：將編碼spike蛋白線性表位C和表位D的核酸序列之間插入編碼柔性氨基酸片段的核酸序列；其中，所述的spike蛋白線性表位C的核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；spike蛋白線性表位D的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示；柔性氨基酸片段的核酸序列如SEQIDNO：6所示。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種豬血清中豬傳染性胃腸炎病毒或豬呼吸道冠狀病毒抗體的ELISA檢測方法，其特征在于所述的編碼柔性氨基酸片段的核酸序列的5’端與編碼spike蛋白線性表位C核酸序列的3’端相連接，編碼柔性氨基酸片段的核酸序列的3’端與編碼spike蛋白線性表位D核酸序列的5’端相連接。