[發(fā)明專利]一種耐鹽復合菌劑及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201310207425.5
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN104212734A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發(fā)明（設計）人: 武鳳霞;鄧祖科;吳長春
• 申請（專利權(quán)）人: 北京世紀阿姆斯生物技術(shù)股份有限公司;北京世紀阿姆斯農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N11/14;C09K17/00;C12R1/125;C12R1/465;C09K101/00
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1.一種耐鹽復合菌劑，其特征在于：所述該菌劑由枯草芽孢桿菌和細黃鏈霉菌混合組成，所述枯草芽孢桿菌含有50～70份，所述細黃鏈霉菌含有30～50份，以上份數(shù)為質(zhì)量份數(shù)。

2.一種耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)首先分別將枯草芽孢桿菌、細黃鏈霉菌的菌種進行高密度培養(yǎng)，得到單菌體；

(2)然后將高密度培養(yǎng)得到的單菌體用載體吸附、制備成干燥的單一菌劑；以及

(3)最后將50～70份的枯草芽孢桿菌的單一菌劑與30～50份的細黃鏈霉菌的單一菌劑混合得到耐鹽復合劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述載體包括草炭、蛭石及凹凸棒，所述草炭、蛭石及凹凸棒的質(zhì)量比為1～5∶1～3∶0.2～0.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述單一菌劑中含有菌體為10～20％，以上百分比為質(zhì)量百分比。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌單一菌劑的制備方法包括以下步驟：

(1)將純化培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基上的枯草芽孢桿菌菌種接種至裝有體積比為15～30％的活化培養(yǎng)基的搖瓶中，在培養(yǎng)溫度為36～40℃，搖瓶轉(zhuǎn)速為150～200rpm的條件下，培養(yǎng)24～32小時；

(2)將活化培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌菌種接種到裝有體積比為50～70％發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐內(nèi)，體積接種量為1～3％，在培養(yǎng)溫度為36℃～40℃，發(fā)酵罐攪拌轉(zhuǎn)速為200～220rpm的條件下，培養(yǎng)24～40小時，發(fā)酵罐中枯草芽孢桿菌的含量≥1×10⁹個/mL；以及

(3)將發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌單菌按質(zhì)量百分比5～15％的比例經(jīng)載體吸附得到單一菌劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，所述活化培養(yǎng)基包括15～20g/L的葡萄糖、10～15g/L的蛋白胨、3～7g/L的氯化鈉和0.3～0.8g/L的牛肉膏。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括10～15g/L的玉米粉、3～8g/L的葡萄糖、18～22g/L的豆餅粉、3～8g/L的魚粉、5～10g/L的碳酸鈣、0.8～1.0g/L的硫酸銨、0.1～0.5g/L的磷酸氫二鉀、0.1～0.3g/L的硫酸鎂和0.1～0.3g/L的硫酸錳。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于，所述細黃鏈霉菌單一菌劑的制備方法包括以下步驟：

(1)將純化培養(yǎng)的斜面培養(yǎng)基上的細黃鏈霉菌菌種接種至裝有體積比為15～30％的活化培養(yǎng)基的搖瓶中，在pH為7.2-7.4，培養(yǎng)溫度為26～30℃，搖瓶轉(zhuǎn)速為150～200rpm的條件下，培養(yǎng)45～60小時；

(2)將活化培養(yǎng)的細黃鏈霉菌菌種接種到裝有體積比為50～70％培養(yǎng)基的固體發(fā)酵罐內(nèi)，接種量體積比為1～3％，在培養(yǎng)溫度為27℃～30℃的條件下，培養(yǎng)90～120天，發(fā)酵罐鏈霉菌的含量≥1×10⁸個/mL；以及

(3)將發(fā)酵得到的細黃鏈霉菌單菌按質(zhì)量百分比10～20％的比例經(jīng)載體吸附得到單一菌劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，所述活化培養(yǎng)基包括20～25g/L的可溶性淀粉、1～1.5g/L的硝酸鉀、0.5～1.0g/L的氯化鈉、0.5～1.0g/L的磷酸氫二鉀、0.5～1.0g/L的硫酸鎂、0.01～0.05g/L的硫酸亞鐵和1L的水。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的耐鹽復合菌劑的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括30～40％的肥土、10～20％的干牛糞、3～5％的豆餅粉、5～10％的草炭、5～10％的麥麩、10～20％的花生殼粉、5～10％的玉米粉、2～5％的石灰，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.7-8.5，以上百分比為質(zhì)量百分比。