[發(fā)明專利]吐溫80結(jié)合超聲波獲得叢粒藻單細胞的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310204936.1
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103275967A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設計）人: 茅云翔;曹敏;張芳芳;孔凡娜;隋正紅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N1/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種使用表面活性劑結(jié)合超聲波獲得叢粒藻單細胞的方法，包括以下具體步驟：

(1).收集處于穩(wěn)定期的藻細胞，用表面活性劑孵育藻細胞：

使用篩絹排除叢粒藻在生長過程中自己釋放的單細胞后，按體積比10∶1收集藻液溶于表面活性劑中；并置于振蕩儀器上震蕩，使藻細胞間的烴類和脂類物質(zhì)完全乳化；

(2)利用超聲波的機械力對孵育完的藻細胞進行破碎：

將(1)中表面活性劑中孵育后的藻細胞進行超聲破碎；

超聲處理完以后的藻細胞，用真空抽濾泵和濾膜，進行分離表面活性劑和藻細胞；抽濾完以后把留在濾膜上的藻細胞重懸在培養(yǎng)基中，對于重懸的藻細胞再進行一次短時間的超聲破碎，再一次用濾膜經(jīng)過抽濾的方法收集藻細胞；再次用無菌的培養(yǎng)基重懸沖洗；最后將處理完的藻細胞重懸在培養(yǎng)基中，進行顯微觀察，發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)了單細胞，但是單細胞是和未完全裂解的藻集落混合在一起的；

(3)分離得到單個游離的細胞

用篩絹過濾得到的單細胞和藻集落的混合藻液，把較大的藻集落留在篩絹上，大多單細胞的藻和兩細胞的藻被過濾到液體中，把過濾的培養(yǎng)液通過濾膜收集起來，重懸在無菌的培養(yǎng)基中；

(4)單細胞活性的檢測

在連續(xù)的培樣和觀察過程中，發(fā)現(xiàn)大于90％的藻細胞的存活狀態(tài)較好：細胞性狀穩(wěn)定，沒有細胞膜的破裂和色素的溶出，部分獲得的單細胞在培養(yǎng)3-4天以后還可以進行進一步的分裂。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，篩絹為500目。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述震蕩儀器為超聲波、渦旋儀或振蕩培養(yǎng)儀器。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，(2)中超聲功率為200w，超聲時間為5s，間隙時間為5s，總處理時間為1min。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，濾膜孔徑為8μm。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，培養(yǎng)基為BG-11培養(yǎng)基。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述表面活性劑為體積百分數(shù)為5％的吐溫80。