[發明專利]一種用于評價細菌趨化性的微孔小室及其評價方法

有效

• 申請號: 201310204738.5
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103305404A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 梁凱強;王香增;高瑞民;江紹靜;洪玲;李世強;趙麗;薛媛
• 申請（專利權）人: 陜西延長石油（集團）有限責任公司研究院
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責任公司 61108
• 代理人: 張超

技術領域

本發明涉及一種用于評價細菌趨化性的微孔小室及其評價方法。

背景技術

有運動能力的微生物對多種化學物質的濃度梯度產生趨向或離避響應的行為稱為趨化性(chemotaxis)。微生物趨化性在諸如在位生物除污、生物膜的形成、感染的發病機制、微生物在地下環境和土壤中的遷移以及微生物采油等領域的研究中具有重要意義。

目前研究細菌趨化性的方法主要有三種：細菌涌動平板法、毛細管法、瓊脂糖內塞法。這些方法都具有各自的特點：細菌涌動平板法能夠在宏觀條件下觀察細菌的趨化性，但需要配制培養基及無菌操作，使得操作繁瑣，耗時長；毛細管法與瓊脂糖內塞法都能夠在微觀條件下反映出細菌對某種引物的趨化性，但是二者都受顯微條件的限制。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種用于評價細菌趨化性的微孔小室及其評價方法，以克服現有技術中存在的缺陷。

本發明的技術方案為：?一種用于評價細菌趨化性的微孔小室，其特征在于：

包括用于放置菌液的上室和用于放置引物的下室，上室和下室之間設置有濾膜。

所述濾膜為聚碳酸濾膜。

所述聚碳酸濾膜的孔徑為0.22um、5um或8um。

所述聚碳酸濾膜的孔徑為3um。

所述微孔小室評價細菌趨化性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1]?取菌體，洗滌菌體，測出菌濃；

2]?在下室中加入引物，將濾膜覆蓋在下室上面，將將上室安裝在濾膜上，在上室中加入菌液；

3]?將小室放到細菌生長最佳溫度下，使菌體能夠順利通過濾膜進入下室，培養一段時間后，取出小室；

4]?取上室菌液及下室菌液測菌濃，統計出進入下層的細菌數，計算出細菌的透過率，通過透過率反映細菌對該引物的趨化能力。

所述步驟1]中，將生長到對數后期的細菌4000rpm離心1分鐘取菌體，加入1ml運動緩沖液洗滌菌體，重復3—5次，測出菌濃；

步驟2]中，在微孔小室的下室中加入200ul的引物，將3um孔徑濾膜覆蓋在下室上面，將小室的上室安裝在濾膜上，上下室之間只有通過濾膜才能夠進行物質交換，在上室中加入800ul用緩沖液洗滌過的菌體；

步驟3]中，培養時間在30分鐘以內。

所述運動緩沖液的配制方法為：配制25mM磷酸氫二鉀和25mM的磷酸二氫鈉混合液，PH調到6.8，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘。

本發明的技術效果為：

與現有技術中的細菌涌動平板法相比，微孔小室法操作更加簡單，不需要配制培養基及無菌操作，用于檢測細菌趨化性的微孔小室可以多次重復利用，檢測時間更短。

本發明簡單易行，不受顯微條件的限制，能夠在宏觀條件下通過數據反映細菌的趨化性及趨化能力，建立了一種評價細菌趨化性的新標準。能很好的反應出細菌對不同的引物的趨化性，也能夠比較不同菌株對同一引物的趨化能力。這是研究細菌趨化性的一種新的方法。

用微孔小室研究細菌趨化性的方法，是根據細菌能夠趨化性主動遷移，穿過一定孔徑的PVPF聚碳酸膜而設計的。用濾膜將微孔小室分隔成上下兩室，在下室中加入引物，在上室中加入菌液，引物通過濾膜形成濃度梯度，細菌則沿著引物濃度梯度穿過濾膜進入下室，一段時間后統計進入下室的細菌數，與原始加入上室的細菌數比較計算出細菌的透過率，以細菌的透過率反映細菌對引物的趨化能力，透過率=（進入下室細菌數-空白對照）/原始上層細菌數。通過測量下室的菌濃反應進入下室的細菌數，與原始菌濃對比計算出細菌的透過率。細菌因其個體比較小，在常規3um-8um孔徑PVPF聚碳酸膜下都能通過，但對于不同引物，細菌完全通過的時間是不同的，因此，用這種方法可以比較出細菌對不同引物的趨化能力。

用微孔小室研究細菌趨化性，能很好的反映細菌對水溶性引物的趨化能力，方法簡單易行，可以廣泛用于與細菌趨化性相關的研究領域。

附圖說明

圖1微孔趨化小室的結構示意圖。

附圖標記為：

1—上室，2—下室，3—濾膜，4—菌液，5—引物。

具體實施方式

本發明屬于生命科學領域，具體涉及一種研究細菌趨化性以及評價細菌的趨化性能力的方法。

參見圖1，本發明涉及的一種用于評價細菌趨化性的微孔小室具體為：

包括用于放置菌液4的上室1和用于放置引物5的下室2，上室1和下室2之間設置有濾膜3。

本發明中的濾膜3可為聚碳酸濾膜。