[發(fā)明專利]一種用于評價細菌趨化性的微孔小室及其評價方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310204738.5
• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103305404A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設計）人: 梁凱強;王香增;高瑞民;江紹靜;洪玲;李世強;趙麗;薛媛
• 申請（專利權）人: 陜西延長石油（集團）有限責任公司研究院
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責任公司 61108
• 代理人: 張超

1.一種用于評價細菌趨化性的微孔小室，其特征在于：包括用于放置菌液（4）的上室（1）和用于放置引物（5）的下室（2），上室（1）和下室（2）之間設置有濾膜（3）。

2.根據(jù)權利要求1所述用于評價細菌趨化性的微孔小室，其特征在于：所述濾膜（3）為聚碳酸濾膜。

3.根據(jù)權利要求2所述用于評價細菌趨化性的微孔小室，其特征在于：所述聚碳酸濾膜的孔徑為0.22um、5um或8um。

4.根據(jù)權利要求2所述用于評價細菌趨化性的微孔小室，其特征在于：所述聚碳酸濾膜的孔徑為3um。

5.一種利用如權利要求1所述微孔小室評價細菌趨化性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1]?取菌體，洗滌菌體，測出菌濃；

2]?在下室（2）中加入引物（5），將濾膜（3）覆蓋在下室（2）上面，將將上室（1）安裝在濾膜（3）上，在上室（1）中加入菌液（4）；

3]?將小室放到細菌生長最佳溫度下，使菌體能夠順利通過濾膜（3）進入下室（2），培養(yǎng)一段時間后，取出小室（2）；

4]?取上室菌液及下室菌液測菌濃，統(tǒng)計出進入下層的細菌數(shù)，計算出細菌的透過率，通過透過率反映細菌對該引物的趨化能力。

6.根據(jù)權利要求5所述評價細菌趨化性的方法，其特征在于：

所述步驟1]中，將生長到對數(shù)后期的細菌4000rpm離心1分鐘取菌體，加入1ml運動緩沖液洗滌菌體，重復3—5次，測出菌濃；

步驟2]中，在微孔小室的下室（2）中加入200ul的引物（5），將3um孔徑濾膜（3）覆蓋在下室（2）上面，將小室的上室（1）安裝在濾膜（3）上，上下室之間只有通過濾膜（3）才能夠進行物質(zhì)交換，在上室（1）中加入800ul用緩沖液洗滌過的菌體；

步驟3]中，培養(yǎng)時間在30分鐘以內(nèi)。

7.根據(jù)權利要求6所述評價細菌趨化性的方法，其特征在于：

所述運動緩沖液的配制方法為：配制25mM磷酸氫二鉀和25mM的磷酸二氫鈉混合液，PH調(diào)到6.8，121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘。