[發(fā)明專利]由核苷氫亞磷酸單酯合成對稱雙核苷二磷酸二鈉鹽的方法

有效

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• 申請日: 2013-05-29
• 公開（公告）號: CN103254260A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發(fā)明（設計）人: 孫麒;龔珊珊;劉思;蒲守智;劉剛;多樹旺;肖強
• 申請（專利權）人: 江西科技師范大學
• 主分類號: C07H19/10
• 分類號: C07H19/10;C07H19/20;C07H19/056;C07H1/04
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術領域

本發(fā)明屬于天然產物類生化試劑的化學制備技術領域，涉及一種由核苷氫亞磷酸單酯合成對稱雙核苷二磷酸二鈉鹽的方法。?

背景技術

雙核苷多磷酸化合物是兩個核苷與多個磷酸相連而成的一系列化合物。該類化合物普遍存在人類和哺乳動物體內，參與細胞內外許多重要的生命活動，例如細胞增殖，血小板聚集，神經(jīng)傳遞等。與常見的單核苷多磷酸化合物相比，雙核苷多磷酸化合物具有更好的化學和代謝穩(wěn)定性。因此，該類化合物作為重要的試劑和藥物在分子生物學、生物化學、醫(yī)學、藥學等眾多前沿領域里都得到了廣泛應用，并且在全球有巨大的市場和迅速增長的需求。例如，在麻醉情況下可以通過注入適量的雙腺苷四磷酸（Ap₄A）來降低血壓。雙尿苷四磷酸（Up₄U）已經(jīng)作為一種藥物用來治療干眼綜合癥。尿苷脫氧胞苷四磷酸（Up₄dC）目前正在測試用于治療患者囊胞性纖維癥和視網(wǎng)膜脫落等癥狀。結構最為簡單的一類雙核苷多磷酸化合物是對稱雙核苷二磷酸。雙腺苷二磷酸（Ap₂A）和雙鳥苷二磷酸（Gp₂G）是從人體血小板顆粒和腎上腺中分離出的兩個天然產物，被證實是血管平滑肌細胞的刺激因子。鑒于該類化合物重要的生物學功能以及潛在的藥物開發(fā)價值，近幾十年來文獻報道的對稱雙核苷二磷酸化合物的合成方法主要有以下兩種：?

1、核苷單磷酸縮合法：（1）1953年，Todd等以腺苷單磷酸（AMP）為原料，與三氟乙酸酐室溫反應過夜，得到雙腺苷二磷酸（AppA），產率17%。?（2）、1954年，Khorana等人以二環(huán)已基碳二亞胺（DCC）為縮合試劑，在吡啶的水溶液中與AMP室溫反應42小時，得到AppA，產率55%。（3）、1991年，Kanavorioti等人以核苷單磷酸（NMP）為原料，以三苯基膦，2,2'-二硫二吡啶和N-甲基咪唑為縮合試劑，在二甲基亞砜中室溫反應2.5小時，得到四種的雙核苷二磷酸（Np₂N），產率為84-85%。（4）、1999年，Behrman等將尿苷單磷酸（UMP）溶于干燥的DMF，以苯甲酰氯，對甲苯磺酰氯，或對硝基苯氯甲酸酯等酰氯為縮合試劑，以4-二甲氨基吡啶為催化劑，室溫反應24小時，得到雙核苷二磷酸（Np₂N），產率為40-90%。?（5）、2005年，Shaver等人以羰基二咪唑（CDI）為縮合試劑，在DMF中與尿苷單磷酸50?℃反應24小時，得到雙尿苷二磷酸（UppU），產率63%。

2、核苷磷酰胺法：（1）、2008年，Millo等以DCC嗎啉鹽形式的腺苷磷酰嗎啉為原料與AMP在吡啶中室溫反應72小時，得到雙腺苷二磷酸（AppA），產率90%。（2）、2011年，Taylor等報道了用已保護腺苷磷酰甲基咪唑原料與核苷單磷酸反應的方法，得到AppA，產率64%。?

以上方法都是選用五價核苷單磷酸為原料，而市售的核苷單磷酸價格昂貴，反應前需將其鈉鹽轉化成可溶性有機銨鹽形式。此外，由于反應產率不高，中間體制備步驟繁瑣，產物難以分離等原因，以上方法在雙核苷二磷酸的化學合成應用中都受到一定的限制。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種步驟簡單、制備成本低廉的由核苷氫亞磷酸單酯合成對稱雙核苷二磷酸二鈉鹽的方法。?

本發(fā)明的由核苷氫亞磷酸單酯合成對稱雙核苷二磷酸二鈉鹽的方法，包括以下步驟：?

1、將核苷氫亞磷酸單酯在吡啶中利用三甲基氯硅烷（TMSCl）進行硅基化，轉化為核苷氫亞磷酸二酯；2、在核苷氫亞磷酸二酯中利用碘單質進行氧化，并原位生成高活性的磷酰吡啶雙性離子中間體；?3、在反應體系中間隔5分鐘分兩次加入1.0當量和0.5當量的水，利用原位水解的單磷酸與磷酰吡啶雙性離子中間體的縮合，高產率得到對稱雙核苷二磷酸產物；4、粗產物經(jīng)過葡聚糖凝膠色譜（Sephadex?LH-20）純化，可得到六種高純度對稱雙核苷二磷酸二鈉鹽，如圖1中物質7-12，產率為68-91%。

在步驟1中，將尿苷、胞苷、腺苷、鳥苷、肌苷和利巴韋林的核苷氫亞磷酸單酯三乙胺鹽1.0?mmol（如圖1中物質1-6），溶于5?ml干燥吡啶，加入TMSCl（390μl，3.0?mmol）進行硅基化，室溫反應10分鐘。?

在步驟2中，將I₂（304?mg，1.2?mmol）溶于2?ml干燥吡啶后逐滴加入反應液中至溶液不褪色為止，室溫再反應5分鐘。?