[發(fā)明專(zhuān)利]白血病融合基因的檢測(cè)方法及其引物、探針和基因芯片

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310204497.4
• 申請(qǐng)日: 2013-05-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104178557B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊斐斐;張春秀;張慶華;熊慧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海生物芯片有限公司;上海華盈生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 丁紀(jì)鐵

1.用于非診斷目的的多重RT-PCR聯(lián)合基因芯片檢測(cè)多種融合基因的方法，其特征在于，步驟為：

1)抽提樣本細(xì)胞總RNA；

2)將步驟1)得到的RNA特異性逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA的引物組合為如SEQ IDNo：1～16所示的序列或其完全互補(bǔ)鏈；

3)以cDNA為模板，進(jìn)行兩輪巢式多重RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)，PCR引物組合為如SEQ ID No：17～30所示序列或其完全互補(bǔ)鏈；

4)用含有一條以上檢測(cè)融合基因的特異性探針的基因芯片檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中是否含有相應(yīng)的融合基因片段，所述特異性探針的序列為如SEQ ID No：31～80所示的序列或其完全互補(bǔ)鏈，探針5’端修飾有氨基；

所述步驟3)，第一輪PCR體系20μl，包括：1μl cDNA、3pmol各種PCR引物、4pmol SP6、11mM Tris-HCl、55mM KCl、1.5mM MgCl₂、15％DMSO、0.4mM dNTP和1.25U ExTaq HS酶；第二輪PCR體系20μl，包括：1μl第一輪PCR產(chǎn)物、10mM Tris-HCl、50mM KCl、1.5mM MgCl₂、0.2mMdNTP、2pmol T7和2pmol標(biāo)記生物素的SP6和1U ExTaq HS酶；第一輪PCR程序包括25圈循環(huán)，第二輪PCR程序包括30圈循環(huán)，每圈循環(huán)包括：95℃變性30秒，55℃退火40秒，72℃延伸1分鐘；循環(huán)結(jié)束后，均在72℃延伸7分鐘。

2.用于權(quán)利要求1所述方法的檢測(cè)融合基因的特異性探針組，其特征在于，探針的序列為SEQ ID NO：31～80所示的序列或其完全互補(bǔ)鏈，探針5’端修飾有氨基。

3.用于權(quán)利要求1所述方法的檢測(cè)融合基因的基因芯片，其特征在于，含有權(quán)利要求2所述的探針組。

4.用于權(quán)利要求1所述方法的引物與探針的組合，其特征在于，RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA的引物組合為如SEQ ID No:1～16所示的序列或其完全互補(bǔ)鏈，多重RT-PCR擴(kuò)增cDNA的引物組合為如SEQ ID No:17～30所示的序列或其完全互補(bǔ)鏈，探針的序列為SEQ ID NO：31～80所示的序列或其完全互補(bǔ)鏈，探針5’端修飾有氨基。