[發明專利]一種快速從土壤篩選產抗菌素的放線菌的方法

有效

• 申請號: 201310202954.6
• 申請日: 2013-05-28
• 公開（公告）號: CN103275897A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 陳國華;付桂榮;郭倩倩
• 申請（專利權）人: 三峽大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 成鋼

1.一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

1）土壤樣本的采集及處理：采集新鮮土壤，放入50mL滅菌塑料袋中，立即帶回實驗室，稱取濕重樣品5g于80℃烘干恒重，計算出5g干重土樣所需濕重量；

2）培養：將步驟1）采集的相當于干重5g的濕重樣本經梯度稀釋液稀釋后在65℃水浴恒溫10min，接種于含有高氏一號培養基的培養皿里，培養7-12天；

3）挑選單菌落：將步驟2）中形成的單菌落數量最多的培養皿中所有的單菌落挑選出來進行轉接；

4）長方形轉接：將步驟3）所有單菌落編號，用接種環轉接至新的高氏一號培養基上，劃短線轉接到新培養基中，在28℃培養7-12天，其中每個短線之間距離不少于7mm，每個10cm的培養皿至少可以轉接35個單菌落；

5）篩選：用直徑為4mm的不銹鋼打孔器將生長有放線菌的瓊脂培養基打成2塊圓形的瓊脂培養基塊，用鑷子分別夾取瓊脂塊放置于預先涂布測試的帶細菌的培養基上，37℃培養18-24?h，觀察抗菌活性，產生透明圈的即為有抗菌活性，其中抗菌活性大小R?=?透明圈直徑D?-?瓊脂塊直徑d；

6）將產生透明圈瓊脂塊的原始單菌落重復步驟4）、5）轉接至少10次，進行分離純化，得到穩定的抗菌素放線菌。

2.根據權利要求1所述的一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法，其特征在于：梯度稀釋培養液的培養方法為，將相當于干重5g的濕重樣本加入滅菌水中，充分混勻，得到10^-1的稀釋液；取5mL10^-1的稀釋液加入滅菌水中，充分混勻，得到10^-2的稀釋液；取5mL10^-2的稀釋液加入滅菌水中，充分混勻，得到10^-3的稀釋液。

3.根據權利要求1所述的一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法，其特征在于：長方形轉接中，劃短線的長邊長為8-10mm，寬為一個接種環劃線寬度。

4.根據權利要求1所述的一種快速從土壤中篩選產抗菌素的放線菌的方法，其特征在于：一個原始單菌落通過長方形轉接后可以直接測試兩類不同的細菌：革蘭氏陰性細菌和革蘭氏陽性細菌。