[發明專利]齊考諾肽的制備方法

在審

• 申請號: 201310202089.5
• 申請日: 2013-05-27
• 公開（公告）號: CN103304655A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 郭德文;童光彬;文永均;韓玉
• 申請（專利權）人: 成都圣諾生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫

1.齊考諾肽的制備方法，包括：采用固相多肽合成法制備齊考諾肽線性肽樹脂，齊考諾肽線性肽樹脂再酸解得到齊考諾肽線性肽粗品，齊考諾肽線性肽粗品氧化后得到齊考諾肽粗品，最后齊考諾肽粗品純化得到齊考諾肽純品；其中固相多肽合成法制備齊考諾肽線性肽樹脂的步驟為：從氨基樹脂開始，通過固相偶聯合成法依次接入下列序列中對應片段的Fmoc-保護氨基酸，制備齊考諾肽線性肽樹脂：

R-Cys(Trt)-X(Boc)-X(Boc)-Ala-Lys(Boc)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-

Arg(Pbf)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Trt)-Cys(Trt)-

Y(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Arg(Pbf)-Z(tBu)-Lys(Boc)-Cys(Trt)-氨基樹脂；

其中，R為Fmoc、Boc或H，X為Lys-Gly,Y為Thr-Gly,Z為Ser-Gly。

2.根據權利要求1所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：接入X時，對應的保護氨基酸為Fmoc-Lys(Boc)-Gly-OH。

3.根據權利要求1或2所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：接入Y時，對應的保護氨基酸為Fmoc-Thr(tBu)-Gly-OH。

4.根據權利要求1～3任一項所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：接入Z時，對應的保護氨基酸為Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH。

5.根據權利要求1～4任一項所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：所述Fmoc-保護氨基酸的用量為所投料樹脂總摩爾數的1.2～6倍，優選為2.5～3.5倍。

6.根據權利要求1所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：所述的氨基樹脂選自Rink?Amide?AM樹脂、Rink?Amide樹脂、Rink?MBHA樹脂和Sieber樹脂中的一種；所述的氨基樹脂優選為Rink?Amide?AM樹脂。

7.根據權利要求6所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：所述氨基樹脂的取代值為0.2～1.2mmol/g樹脂；優選的，氨基樹脂的取代值為0.4～0.6mmol/g樹脂。

8.根據權利要求1所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：所述的固相偶聯合成法包括：前一步反應得到的保護氨基酸-樹脂脫去保護Fmoc后再與下一個保護氨基酸偶聯反應。

9.根據權利要求1～8任一項所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：齊考諾肽線性肽樹脂經酸解同時脫去樹脂及側鏈保護基得到齊考諾肽線性肽粗品：

Cys-X-X-Ala-Lys-Cys-Ser-Arg-Leu-Met-Tyr-Asp-Cys-

Cys-Y-Ser-Cys-Arg-Z-Lys-Cys-NH₂；

其中，X為Lys-Gly,Y為Thr-Gly,Z為Ser-Gly。

10.根據權利要求9所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：所述齊考諾肽樹脂酸解時采用的酸解劑為TFA、EDT和水的混合溶劑；所述混合溶劑的體積配比為：80～95%的TFA，1～10%的EDT，余量為水；優選的，混合溶劑的體積配比為89～91%的TFA、4～6%的EDT，余量為水；最優的，混合溶劑的配比為90%的TFA、5%的EDT，余量為水。

11.根據權利要求1～8所述的齊考諾肽的制備方法，其特征在于：齊考諾肽線性肽粗品用醋酸溶解，過濾后用氧化劑氧化環化，得到齊考諾肽粗品；所述的氧化劑為碘、H₂O₂或DMSO中的至少一種。