[發明專利]艾塞那肽的制備方法

有效

• 申請號: 201310201952.5
• 申請日: 2013-05-27
• 公開（公告）號: CN103265630A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 郭德文;曾德志;王曉莉;文永均
• 申請（專利權）人: 成都圣諾生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫

1.艾塞那肽的制備方法，包括：采用固相多肽合成法制備艾塞那肽樹脂，艾塞那肽樹脂再酸解得到艾塞那肽粗品，最后艾塞那肽粗品純化得到艾塞那肽純品；其中，固相多肽合成法制備艾塞那肽樹脂的步驟為：從氨基樹脂開始，通過固相偶聯合成法依次接入下列序列中對應片段的Fmoc-保護氨基酸，制備艾塞那肽樹脂：

R-W(Trt)-X(OtBu)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-

Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-

Val-Arg(Pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Y(Trt)-

-Ser(tBu)-Z(tBu)-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-氨基樹脂；

其中，R為Fmoc、Boc或H，W為His-Gly，X為Glu-Gly，Y為Asn-Gly-Gly-Pro,Z為Ser-Gly。

2.根據權利要求1所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：接入W時，對應的保護氨基酸為Boc-His(Trt)-Gly-OH，或為Fmoc-His(Trt)-Gly-OH。

3.根據權利要求1或2所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：接入X時，對應的保護氨基酸為Fmoc-Glu(OtBu)-Gly-OH。

4.根據權利要求1～3任一項所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：接入Y有兩種接入法：（1）對應的保護氨基酸為Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Gly-OH和Fmoc-Pro-OH；或（2）對應的保護氨基酸為Fmoc-Asn(Trt)-OH和Fmoc-Gly-Gly-Pro-OH。

5.根據權利要求1～4任一項所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：接入Z時，對應的保護氨基酸為Fmoc-Ser(tBu)-Gly-OH。

6.根據權利要求1～5任一項所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：所述Fmoc-保護氨基酸的用量為所投料樹脂總摩爾數的1.2～6倍；優選的所述Fmoc-保護氨基酸的用量為所投料樹脂總摩爾數的2.5～3.5倍。

7.根據權利要求1所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：所述的氨基樹脂選自Rink?Amide?AM樹脂、Rink?Amide樹脂、Rink?MBHA樹脂和Sieber樹脂中的一種；所述氨基樹脂的取代值為0.2～1.2mmol/g樹脂；優選的，氨基樹脂的取代值為0.4～0.6mmol/g樹脂。

8.根據權利要求1所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：所述的固相偶聯合成法包括：前一步反應得到的保護氨基酸-樹脂脫去保護Fmoc后再與下一個保護氨基酸偶聯反應。

9.根據權利要求1～8任一項所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：艾塞那肽樹脂經酸解同時脫去樹脂及側鏈保護基得到艾塞那肽粗品：

W-X-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-

Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-

Lys-Y-Ser-Z-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；

其中，W為His-Gly,X為Glu-Gly,Y為Asn-Gly-Gly-Pro,Z為Ser-Gly。

10.根據權利要求9所述的艾塞那肽的制備方法，其特征在于：所述艾塞那肽樹脂酸解時采用的酸解劑為TFA、EDT和水的混合溶劑，混合溶劑的體積配比為：80～95%的TFA，1～10%的EDT，余量為水；優選的，混合溶劑的體積配比為89～91%的TFA、4～6%的EDT，余量為水；最優的，混合溶劑的配比為90%的TFA、5%的EDT，余量為水。