[發明專利]凝血酶適配體功能化電紡絲增強固相微萃取棒的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201310201032.3
• 申請日: 2013-05-28
• 公開（公告）號: CN103266175A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 杜甫佑;孫林;阮貴華
• 申請（專利權）人: 桂林理工大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N9/74;G01N1/28;C08F220/44;C08F222/06;D01F6/40;D01D5/00
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1.一種凝血酶適配體功能化電紡絲增強固相微萃取棒的制備方法，其特征在于具體步驟為：

(1)采用自由基水相沉淀聚合方法合成聚丙烯腈-馬來酸聚合物:?在圓底燒瓶中加入10.6克丙烯腈和7.4克馬來酸苷，再加入20毫升60?℃的去離子水，60?℃下恒溫水浴并攪拌；通入氮氣10分鐘后，加入135毫克?K₂S₂O₈和75毫克Na₂SO₃引發自由基水相沉淀聚合反應，并將反應的混合溶液迅速采用質量百分比濃度為40~60%的稀H₂SO₄調至pH值為?2.0，聚合反應3?小時，所得產物用去離子水和無水乙醇輪流洗滌4~6次即制得聚丙烯腈-馬來酸聚合物；

(2)采用電紡絲技術將步驟(1)制得的聚丙烯腈-馬來酸聚合物固定在不銹鋼絲表面制成固相微萃取棒:?將4.0克步驟(1)制得的聚丙烯腈-馬來酸聚合物加入到50毫升二甲基甲酰胺中，攪拌至完全溶解，制得聚合物溶液；采用電紡絲技術將聚合物溶液紡絲，接收端為不銹鋼絲，其尺寸為長55毫米×直徑1.5?毫米，紡絲電壓為10?千伏，噴絲端與接收端距離為130?毫米，流速為0.30?毫升/小時，紡絲時間為50分鐘；不銹鋼絲上電噴絲長度為30?毫米，厚度為60-65微米；

(3)通過碳二亞胺方法將凝血酶適配體固定在步驟(2)制成的固相微萃取棒涂層上:?

a、在50?毫摩爾/升且?pH值為8.0的磷酸緩沖液中加入碳二亞胺即EDC和N-羥基丁二酰亞胺即NHS，制得碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺的濃度均為100?毫摩爾/升的EDC/NHS混合溶液；

b、將3根步驟(2)制成的固相微萃取棒放入到2.0?毫升步驟(3)第a?步制得的EDC/NHS混合溶液中活化2小時，再加入200?納摩爾氨基化的凝血酶適配體即5′/5AmMC6/-AGT?CCG?TGG?TAG?GGC?AGG?TTG?GGG?TGA?CT-3′，室溫反應過夜，即制得凝血酶適配體功能化電紡絲增強固相微萃取棒；?

所述化學試劑的純度均為化學純以上純度。

2.根據權利要求1所述的制備方法制備的凝血酶適配體功能化電紡絲增強固相微萃取棒的應用，其特征在于所制備的凝血酶適配體功能化電紡絲增強固相微萃取棒應用于人血清、人血漿和人血液等復雜樣品中痕量凝血酶的選擇性分離、富集和分析。