[發明專利]一種高純度重組人BAFF的制備方法

有效

• 申請號: 201310198851.7
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN103275988A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 崔縣偉;季晨博;付子毅;郭錫熔
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: C12N15/28
• 分類號: C12N15/28;C12N15/70;C12N15/11;C07K14/525
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種經原核細胞適應性密碼子優化的人BAFF基因，其用于表達134-285氨基酸的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.01所示。

2.一種高純度重組人BAFF的制備方法，該方法將優化后的人BAFF功能區的核苷酸序列載入原核表達載體，轉入原核細胞進行培養后誘導表達，離心破碎后，對沉淀包涵體采用尿素逐步變性法除雜，獲得高純度的重組人BAFF蛋白；

其中，所述優化后的人BAFF核苷酸序列的功能區如SEQ?ID?NO.01所示。

3.根據權利要求2所述的一種高純度重組人BAFF的制備方法，其特征在于：用于載入SEQ?ID?NO.01的原核表達載體為pET28a質粒，用于表達載體的原核細胞為DH5a受感態細胞。

4.根據權利要求3所述的一種高純度重組人BAFF的制備方法，其特征在于：將含有pET28a-sBAFF的DH5a接種到LB液體培養基中預培養，然后接種到自動誘導培養基中，加入卡那霉素后振搖培養。

5.根據權利要求2所述的一種高純度重組人BAFF的制備方法，其特征在于：所述尿素逐步變性法依次分別用尿素濃度分別為4M、6M、8M的變性緩沖液重懸離心洗脫1～2次，取上清液再依次用尿素濃度為4M、2M、1M、0.5M的復性緩沖液透析處理。

6.根據權利要求5所述的一種高純度重組人BAFF的制備方法，其特征在于：所述變性緩沖液重懸離心后，加入蛋白質去垢劑連續吹打并高速離心。

7.根據權利要求5所述的一種高純度重組人BAFF的制備方法，其特征在于：所述復性緩沖液還包括100mM?NaH₂PO₄、100mM?Tris、0.6mM?Arg、1mM?GSH、0.2mM?GSSG。

8.根據權利要求5所述的一種高純度重組人BAFF的制備方法，其特征在于：所述復性緩沖液透析12小時后，再12000rpm離心30分鐘。

9.用于擴增SEQ?ID?NO.01的引物，如SEQ?ID?NO.03和SEQ?ID?NO.04所示。