[發(fā)明專利]一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310198839.6
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN103224963A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王世珍;方柏山
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12R1/38
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）細胞液制備：將菌種接入216L培養(yǎng)基中培養(yǎng)，再將培養(yǎng)后獲得的發(fā)酵液離心獲得細胞，用緩沖液重懸、洗滌，配制成細胞液；

2）全細胞催化反應(yīng)：在步驟1）得到的細胞液中，加入酮作為底物，再加入氨基供體和輔助底物，用于輔酶循環(huán)再生，利用細胞催化不對稱還原胺化得到產(chǎn)物手性胺。

2.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟1）中，所述菌種為基爾假單胞菌(Pseudomonas?kilonensis)，基爾假單胞菌(Pseudomonas?kilonensis)已保藏于中國海洋微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為MCCC?NO.1A06062。

3.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟1）中，所述將菌種接入216L培養(yǎng)基中培養(yǎng)的菌種接種量為1%；所述216L培養(yǎng)基的組成為10.0g/L蛋白胨,5.0g/L酵母粉,0.5g/L牛肉膏,0.5g/L檸檬酸鈉,0.2g/L?NH₄NO₃,1.0g/LNaAc，用海水配制。

4.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟1）中，所述培養(yǎng)的條件為：起始pH7.0，裝液量體積分數(shù)為10%，培養(yǎng)溫度30℃，搖床轉(zhuǎn)速150rpm，培養(yǎng)時間72h。

5.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟1）中，所述離心采用冷凍離心機，離心的條件為4℃，10000rpm，15min，獲得細胞。

6.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟1）中，所述用緩沖液重懸、洗滌的方法是棄上清液，緩沖液重懸，洗滌后離心，重復(fù)操作3次。

7.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟1）中，所述細胞液的濃度為0.025～100g/L；所述緩沖液可選自0.01～0.2mol/L的pH為7～13的Tris-鹽酸、乙酸鈉、碳酸鈉、磷酸鉀中的至少一種，優(yōu)選pH9的Tris-鹽酸緩沖液。

8.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟2）中，所述酮選自0.001～0.5mol/L的碳鏈長度2～10的脂肪族酮、芳香酮、羥基酮中的一種；所述氨基供體可選自0.002～1mol/L的丙氨酸、氨水、NH₄Cl、NH₄NO₃、氨基烷烴中的一種，優(yōu)選氨水或NH₄Cl。

9.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟2）中，所述輔助底物選自0.001～1mol/L的葡萄糖、甘油、乙醇、甲酸、異丙醇、仲丁醇中的至少一種，優(yōu)選葡萄糖、甘油中的至少一種。

10.如權(quán)利要求1所述一種海洋菌株催化不對稱還原制備手性胺的方法，其特征在于在步驟2）中，所述利用細胞催化不對稱還原胺化的條件是pH7～13，反應(yīng)溫度0～70℃，震蕩速率100～300rpm，反應(yīng)時間30～180h。