[發明專利]魚類白細胞分離方法

有效

• 申請號: 201310197729.8
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN103289953A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 唐琳;曾伯平;王文彬;羅玉雙;李榮
• 申請（專利權）人: 湖南文理學院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078
• 代理公司: 常德市源友專利代理事務所 43208
• 代理人: 章祖斌

1.魚類白細胞分離方法，其特征在于：該方法是在無菌條件下，將魚類全血細胞接種到不含動物血清的動物細胞培養基中培養，其中全血細胞接種密度為10⁶-10¹⁰個/毫升培養基，培養條件為15℃-37℃的溫度、90%-98%的濕度和0-8?%的二氧化碳。

2.根據權利要求1所述的魚類白細胞分離方法，其特征在于：所述全血細胞接種密度優選為10⁷~10⁹個/毫升培養基。

3.根據權利要求2所述的魚類白細胞分離方法，其特征在于：所述培養條件優選為25℃-30℃的溫度、92%-96%的濕度和3-5?%的二氧化碳。

4.根據權利要求1或2或3所述的魚類白細胞分離方法，其特征在于：所述動物細胞培養基組成物之一載劑優選為蒸餾水、去離子水、注射用水、重蒸水及超純水中的一種或多種。

5.根據權利要求4所述的魚類白細胞分離方法，其特征在于：所述動物細胞培養基的制備方法是將動物細胞培養基干粉組合物分散在載劑中，再過濾除菌。

6.根據權利要求5所述的魚類白細胞分離方法，其特征在于：所述不含動物血清的動物細胞培養基是由培養基干粉組合物和載劑組成，其中培養基干粉組合物的組分及含量為每升培養基包括無水氯化鈣?.2H2O?250.00-270.00?mg、硝酸鐵.9H2O?0.05-0.15?mg、氯化鉀300.00-500.00?mg、無水硫酸鎂95.00-100.00?mg、氯化鈉6300.00-6500.00?mg、無水磷酸二氫鈉108.00-110.00?mg、丁二酸70.00-80.00?mg、丁二酸鈉90.00-110.00?mg、L-鹽酸精氨酸82.00-86.00?mg、L-鹽酸胱氨酸60.00-65.00?mg、甘氨酸20.00-40.00?mg、L-鹽酸組氨酸40.00-44.00?mg、L-異亮氨酸100.00-110.00?mg、L-亮氨酸100.00-110.00?mg、L-鹽酸賴氨酸144.00-148.00?mg、L-甲硫氨酸20.00-60.00?mg、L-苯丙氨酸64.00-68.00?mg、L-絲氨酸38.00-45.00?mg、L-蘇氨酸90.00-100.00?mg、L-色氨酸14.00-18.00?mg、L-酪氨酸70.00-74.00?mg、L-纈氨酸92.00-96.00?mg、D-泛酸鈣2.00-6.00?mg、酒石酸膽堿7.00-7.40?mg、葉酸2.00-6.00?mg、肌醇7.00-7.60?mg、煙酰胺2.00-6.00?mg、核黃素0.20-0.60?mg、鹽酸硫胺2.00-6.00?mg、鹽酸吡哆辛2.00-6.00?mg、葡萄糖800.00-3000.00?mg、丙酮酸鈉100.00-120.00?mg、酚紅9.00-9.60?mg、碳酸氫鈉3500.00-4000.00?mg。

7.根據權利要求5所述的魚類白細胞分離方法，其特征在于：所述培養基干粉組合物的組分及含量優選為每升培養基包括無水氯化鈣?.2H2O?255.00-265.00?mg、硝酸鐵.9H2O?0.08-0.12?mg、氯化鉀350.00-450.00?mg、無水硫酸鎂96.00-98.00?mg、氯化鈉6350.00-6450.00?mg、無水磷酸二氫鈉108.00-110.00?mg、丁二酸72.00-78.00?mg、丁二酸鈉95.00-105.00?mg、L-鹽酸精氨酸83.00-85.00?mg、L-鹽酸胱氨酸62.00-64.00?mg、甘氨酸25.00-35.00?mg、L-鹽酸組氨酸41.00-43.00?mg、L-異亮氨酸101.00-109.00?mg、L-亮氨酸101.00-109.00?mg、L-鹽酸賴氨酸145.00-147.00?mg、L-甲硫氨酸205.00-55.00?mg、L-苯丙氨酸65.00-67.00?mg、L-絲氨酸40.00-44.00?mg、L-蘇氨酸92.00-98.00?mg、L-色氨酸15.00-17.00?mg、L-酪氨酸71.00-73.00?mg、L-纈氨酸93.00-95.00?mg、D-泛酸鈣2.50-5.50?mg、酒石酸膽堿7.10-7.30?mg、葉酸3.00-5.00?mg、肌醇7.10-7.50?mg、煙酰胺3.00-5.00?mg、核黃素0.30-0.50?mg、鹽酸硫胺3.00-5.00?mg、鹽酸吡哆辛3.00-5.00?mg、葡萄糖900.00-2000.00?mg、丙酮酸鈉105.00-115.00?mg、酚紅9.10-9.50?mg、碳酸氫鈉3600.00-3800.00?mg。