[發明專利]豬圓環病毒2型、豬支原體肺炎二聯滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201310196925.3
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN103263666B
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 陳碩;王勇;王貴華;車艷杰;趙亞榮;汪竹君;馬騰
• 申請（專利權）人: 北京大北農科技集團股份有限公司動物醫學研究中心;北京大北農科技集團股份有限公司;福州大北農生物技術有限公司;北京科牧豐生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/295;A61P31/20;A61P31/04;C12N7/00;C12N1/20
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本發明公開了一種豬圓環病毒2型、豬支原體肺炎二聯滅活疫苗，其含有滅活的豬圓環病毒2型抗原和滅活的豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae）以及油佐劑，其中，所述的豬肺炎支原體為DJ?166株，保藏號為CGMCC No.4545。本發明提供的豬用二聯滅活疫苗在預防豬圓環病毒2型和豬支原體肺炎方面表現出顯著的技術效果。安全性試驗顯示，疫苗單劑量、單劑量重復、超劑量接種試驗動物后安全，體溫、精神狀態正常，無任何臨床癥狀；效力試驗顯示，本發明疫苗對豬圓環病毒2型和豬肺炎支原體的強毒攻擊有良好的保護作用，可有效的預防豬圓環病毒2型和豬支原體肺炎。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品領域，具體涉及豬圓環病毒2型、豬支原體肺炎二聯滅活疫苗及其制備方法。

背景技術

豬支原體肺炎（Mycoplasma hyopneumoniae of swine，MPS）又稱豬地方流行性肺炎或豬喘氣病，由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhyo）引起的豬接觸性慢性呼吸道疾病，呈全世界廣泛流行，是嚴重危害養豬業健康發展的主要豬病之一。豬支原體肺炎死亡率雖然不高，但由于流行的廣泛性、長期性和消耗性，可使飼料轉化率降低，并引起豬的多種并發病，是造成養豬業經濟損失的最重要的疾病之一。

目前用于豬支原體肺炎免疫的疫苗有兩種，即滅活疫苗和弱毒疫苗。國外廠家生產的多為滅活疫苗，以佐劑克服滅活疫苗的不足，因為肌肉接種，使用方便，但是價格昂貴，且免疫效果方面與國內存在差異。國內生產的弱毒疫苗可以產生較強的局部粘膜免疫力和細胞免疫力，免疫期較長，但需要胸腔內注射，使用不方便，有一定的接種副反應，并且要求疫苗免疫后一周內避免使用抗菌素。因此如何獲得一種符合國內豬支原體肺炎流行狀況且免疫原性好、保護效果好的滅活疫苗是當務之急。

另外，豬支原體肺炎感染后可引起豬體的免疫抑制，導致豬體的免疫功能下降，對豬的巨噬細胞、T細胞和B細胞的功能均有抑制。因此，豬群一旦發生豬支原體肺炎感染，就很容易與其它病毒和細菌發生混合感染，以豬圓環病毒2型（Porcine Circovirus type2，PCV2）最為常見。而現階段，國內還沒有豬圓環病毒2型、豬支原體肺炎的二聯滅活疫苗上市，因此一種能防治豬支原體肺炎和豬圓環病毒2型混合感染的疫苗也是必不可少的。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供一種豬圓環病毒2型、豬支原體肺炎二聯滅活疫苗及其制備方法和應用。

首先，本發明提供一種豬圓環病毒2型、豬支原體肺炎二聯滅活疫苗，其含有滅活的豬圓環病毒2型抗原和滅活的豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae）抗原以及油佐劑，其中，所述的豬肺炎支原體為DJ-166株，保藏號為CGMCC No.4545。

其中，所述的油佐劑為Montanide ISA50V2佐劑。

其中，所述的滅活的豬肺炎支原體DJ-166株抗原含量不低于10⁹CCU/ml。

其中，所述的滅活的豬圓環病毒2型抗原的含量不低于10^6.5TCID₅₀/ml。

本發明提供的二聯滅活疫苗，其含有的兩種抗原之間基本上無干擾現象。

“基本上無干擾現象”是指，所述的二聯滅活疫苗在免疫豬以后，兩種抗原之間不會顯著削弱對方的免疫效果。

本發明還提供所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其包括如下步驟：

1）分別增殖濃縮豬圓環病毒2型毒液和豬肺炎支原體菌液；

2）分別滅活豬圓環病毒2型濃縮毒液和豬肺炎支原體濃縮菌液；

3）制備油相：將Montanide ISA50V2佐劑裝入滅菌瓶內，121℃滅菌30分鐘；