[發(fā)明專利]一種利用天津短桿菌和植物乳桿菌混合發(fā)酵高產(chǎn)GABA的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310196284.1
• 申請日: 2013-05-24
• 公開（公告）號: CN103243128A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 饒志明;孫紅梅;李秀鵬;徐美娟
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12R1/25;C12R1/13
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用天津短桿菌和植物乳桿菌混合發(fā)酵高產(chǎn)γ-氨基丁酸的方法，其特征是：利用廉價的葡萄糖為原料，通過兩步連續(xù)發(fā)酵生產(chǎn)γ-氨基丁酸，第一步采用谷氨酸生產(chǎn)菌株天津短桿菌SW07-1將葡萄糖轉(zhuǎn)化為谷氨酸，第二步采用全細胞轉(zhuǎn)化的方法，將能產(chǎn)生谷氨酸脫羧酶的菌株L.plantarum?GB01-21添加到谷氨酸發(fā)酵液，建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化體系，催化谷氨酸脫羧形成γ-氨基丁酸。

2.權(quán)利要求1中第一步用天津短桿菌SW07-1的發(fā)酵谷氨酸的方法，其特征是：將保存菌種接入活化培養(yǎng)基，30℃，220r/min往復(fù)式搖床振蕩培養(yǎng)12h，再以2％的接種量接種至種子培養(yǎng)基，30℃，220r/min往復(fù)式搖床培養(yǎng)12h，再以10％接種量接種至5L發(fā)酵罐，發(fā)酵罐中裝液量為2.5L，通氣量3.5L/min，流加氨水控制pH7.0-7.2，根據(jù)溶氧需求調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速400-600r/min，30℃培養(yǎng)36h；最終發(fā)酵液中谷氨酸含量約90g/L左右。

3.權(quán)利要求1中第二步植物乳桿菌的培養(yǎng)與菌體收集方法，其特征是：將保存菌種接入活化培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基，30℃，靜置培養(yǎng)1d，再以12％的接種量接種至裝有3L無菌TYG液體培養(yǎng)基的5L發(fā)酵罐中，攪拌速度和通氣量分別為300r/min、1.25L/min，30℃培養(yǎng)36h，4000r/min離心10min收集菌體。

4.權(quán)利要求1中第二步全細胞轉(zhuǎn)化方法，其特征是：按照醋酸緩沖液的配制方法向天津短桿菌谷氨酸發(fā)酵液中加入對應(yīng)量的無水乙酸鈉和冰醋酸，構(gòu)成0.2mol/L，pH5.0的醋酸緩沖體系，同時，將前一步收集到的植物乳桿菌加入到緩沖體系中(添加的菌體量按照植物乳桿菌培養(yǎng)液體積∶谷氨酸發(fā)酵液體積＝3∶2來計算)，作為轉(zhuǎn)化體系，攪拌速度和通氣量分別為150r/min、0.5L/min，30℃進行轉(zhuǎn)化20h，發(fā)酵液中原有谷氨酸轉(zhuǎn)化完畢，繼續(xù)向轉(zhuǎn)化體系中加入60g/L的外源谷氨酸作為底物，繼續(xù)轉(zhuǎn)化。

5.權(quán)利要求4中的底物與產(chǎn)物的定性與定量分析以及菌體生長情況的監(jiān)測方法，其特征是發(fā)酵液中葡萄糖和谷氨酸的實時檢測通過SBA-40B生物傳感分析儀測定；γ-氨基丁酸通過氨基酸測定儀測定；利用氨基酸測定儀分別測定標準樣品γ-氨基丁酸和轉(zhuǎn)化液各自的出峰時間和峰面積，即可以對轉(zhuǎn)化液中γ-氨基丁酸進行定性與定量檢測。