[發明專利]二點委夜蛾與其形態相似種的PCR鑒定引物及其鑒定方法無效
| 申請號： | 201310192234.6 | 申請日： | 2013-05-22 |
| 公開（公告）號： | CN103266174A | 公開（公告）日： | 2013-08-28 |
| 發明（設計）人： | 褚棟;李麗莉;國棟;陶云荔 | 申請（專利權）人： | 青島農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 266109 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 二點委 夜蛾 與其 形態 相似 pcr 鑒定 引物 及其 方法 | ||
1.一種二點委夜蛾與其形態相似種的PCR鑒定引物，所述引物為一對，分別為SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。
2.一種二點委夜蛾與其形態相似種的PCR鑒定方法，其特征在于，步驟如下：
（1）提取待鑒定樣品的基因組DNA，得基因組DNA溶液；
（2）以步驟（1）制得的基因組DNA為模板，利用上述的一對引物對基因組DNA中的線粒體COI基因進行PCR擴增，制得PCR擴增產物；
（3）用限制性內切酶RsaⅠ酶切步驟（2）制得的PCR擴增產物，得酶切產物；
（4）對步驟（3）制得的酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，當PCR產物電泳圖譜顯示被測樣品在650bp無條帶時，則該被檢測樣品為二點委夜蛾；當PCR產物電泳圖譜顯示被測樣品在650bp有條帶時，則為形態相似種。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增的擴增體系為：
基因組DNA溶液2.5μl，20μM引物0.5μl，5U/μl?Taq酶0.25μl，10×Taq?Buffer（緩沖液）2.5μl，10mM?dNTP0.5μl，ddH20補至25μl；
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR擴增的擴增條件如下：
94℃預變性5分鐘；94℃變性50秒，48℃退火50秒，72℃延伸50秒，進行35個循環；72℃延伸7分鐘。
5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中限制內切酶RsaⅠ酶切反應條件如下：37℃酶切2小時。
6.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中的待鑒定樣品為二點委夜蛾或二點委夜蛾形態相似種。
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