[發明專利]一種胸腺五肽的液相合成方法

無效

• 申請號: 201310191867.5
• 申請日: 2013-05-22
• 公開（公告）號: CN103819539A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 周蘭霞;李續
• 申請（專利權）人: 蘭州大學第一醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種胸腺五肽的液相合成方法，可適用于規模化大生產。

背景技術

胸腺五肽(?Thymopentin,?TP5)是促胸腺生成素32~?36上5個氨基酸組成的小肽，基本序列為NH₂-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH，它保留了胸腺生成素的有效生物活性，有調節和增強人體細胞免疫功能的作用，是目前治療艾滋病的最有療效和潛力的胸腺激素之一，其注射用藥劑是目前世界上處方量處于第一位的免疫調節劑。

胸腺五肽在醫用上良好的產業前景使得人們將注意力紛紛集中在大規模生產上，由于采用生物提取會受材料來源限制，而基因表達技術運用在小分子肽上存在困難等問題，其分子式簡單的特點使化學法合成胸腺五肽獨具優勢。而傳統的固相合成成本高，且生產規模較小，而液相合成胸腺五肽適用于大規模化生產的特點，使得液相合成成為主要優選途徑。

許多文獻和專利報道了采用液相合成技術制備胸腺五肽的方法，與本發明相近的技術主要有：

中國專利CN101597318A公開的方法是采用以酪氨酸芐酯鹽酸鹽為起始原料，以N-甲基嗎啉為催化劑，采用氯甲酸烷基酯為活化劑，活化被保護的氨基酸形成高活性的混合酸酐與氨基端裸露的氨基酸或肽反應，制備高純度胸腺五肽。該技術大都采用Fmoc基團保護氨基酸的氨基末端，只有最后一個精氨酸氨基末端用Boc基團保護，不過該精氨酸胍基未保護。該技術的缺點是由于芴甲氧羰基衍生物價格昂貴，使得生產成本很高；另外在脫去Fmoc基團時使用價格較為昂貴的哌啶，也大大增加了成本；而且使用胍基未保護的精氨酸使得五肽副產物較多，增加了純化難度。

中國專利CN1442428A公開的方法是以酪氨酸衍生物為原料，進行多次縮合反應，依次分別連接由叔丁氧羰基、芴甲氧羰基等保護基團保護的纈氨酸、天冬氨酸、賴氨酸，生成保護四肽，在連接精氨酸進行五肽合成時，利用的是芴甲氧羰基作為保護基對精氨酸的氨基酸進行保護，生成保護五肽，再分步脫去幾種不同的保護基得到胸腺五肽。該技術的缺點是Boc和Fmoc基團脫除分別使用昂貴的TFA和哌啶，大大增加了成本；而且生成的保護五肽上有兩種保護基，在脫去保護基團時至少需要經過兩步反應，即需要不同的方法脫去不同的保護基，如文獻方法是用催化氫化、酸解兩次反應才能脫去所有保護基。

中國專利CN1704430A公開的方法是采用側鏈官能團未保護的Arg和Tyr為原料合成胸腺五肽。該技術缺點是需要極其溫和的反應條件，且副產物較多，增加了純化難度；還有就是要在壓力容器條件下重金屬催化氫化除去精氨酸氨基末端的芐氧羰基。

中國專利CN1844142A公開的方法是以酪氨酸衍生物為原料，通過四次縮合反應，依次分別連接芐氧羰基保護的纈氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、精氨酸，生成保護五肽。該技術采用叔丁氧羰基對精氨酸進行保護，可一次性脫除所有保護基得到胸腺五肽，簡化了步驟，但缺點是使用芐氧羰基作為保護基，得到的產物溶解性很差，在溶劑中成果凍狀，無法進行過濾，使得產物純化十分困難，而且脫去時也較為麻煩。

因此，需要一種簡單、快速、成本低、原料易得和可行成規模的合成胸腺五肽的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種步驟精簡且收率高的胸腺五肽的液相合成方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種胸腺五肽的液相合成方法，該方法包括如下步驟：

(1)?以Boc-Tyr-OH為起始原料，其羧基和酚羥基在碳酸鉀和四丁基碘化銨存在下，用芐溴處理得到被Bzl芐基保護的酪氨酸，然后經檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液萃取，再用硫酸鈉固體干燥，得到的有機溶液減壓旋蒸，得到Boc-Tyr(Bzl)-?OBzl產物。該產物溶于乙酸乙酯溶液，并向其中通入HCl氣體，得到脫去Boc保護基團的NH₂-Tyr(Bzl)-OBzl鹽酸鹽產物；

(2)?將NH₂-Tyr(Bzl)-OBzl鹽酸鹽和Boc-Val-OH在DIEA提供的堿性條件下，以及HOBT、HBTU縮合劑作用下反應，再經過酸堿洗脫除水干燥，得到Boc-Val-Tyr(Bzl)-OBzl二肽；

(3)?脫去(2)中得到的二肽氨端保護基，然后得到的產物與Boc-Asp(OBzl)-OH在縮合劑下反應，經過酸堿洗脫除水干燥，得到Boc-Asp(OBzl)-Val-Tyr(Bzl)-OBzl三肽；