[發(fā)明專利]一種釀酒酵母發(fā)酵液中提取S-腺苷甲硫氨酸的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310191326.2
• 申請(qǐng)日: 2013-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103265595A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡永紅;開(kāi)玉美;楊文革;曹崢;湯天羽;管珺;殷晶晶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京基準(zhǔn)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07H19/167
• 分類號(hào): C07H19/167;C07H1/08
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;袁正英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從發(fā)酵液中提純S-腺苷甲硫氨酸的工藝，屬于生物工程領(lǐng)域，具體涉及生物制藥，發(fā)酵產(chǎn)物的提取，分離的方法，特別涉及一種從釀酒酵母發(fā)酵液中提取S-腺苷甲硫氨酸的方法。

技術(shù)背景

S-腺苷甲硫氨酸簡(jiǎn)稱SAM或AdoMet，是甲硫氨酸的活性形式。SAM在室溫中性或堿性環(huán)境中，只要稍微吸濕就會(huì)導(dǎo)致快速失活，SAM與一些大分子的陰離子結(jié)合成鹽，可以提高空間位阻，增加SAM的穩(wěn)定性，尤其是與水溶性電解質(zhì)，如磷酸鹽、聚乙烯磺酸硫酸鹽、聚乙烯磺酸磷酸鹽、聚苯乙烯磺酸鹽等結(jié)合后所形成鹽有比較好的穩(wěn)定性。

SAM是生物體內(nèi)重要的中間代謝物質(zhì)，參與多種生化反應(yīng)，主要為體內(nèi)激素、神經(jīng)遞質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)、和磷脂的生物合成、代謝以及抗氧化劑的形成，與體內(nèi)各種解毒過(guò)程關(guān)系密切，其中最重要的生理作用是轉(zhuǎn)甲基作用、轉(zhuǎn)丙氨基作用、轉(zhuǎn)硫作用。SAM是維護(hù)細(xì)胞膜正常功能、人體正常代謝和將抗不可缺少的重要生命物質(zhì)。

目前，全球每年用在治療肝病和帕金森氏等病的SAM大約需要450～500噸左右。隨著生活節(jié)奏的加快和工作壓力的增加，抑郁癥患者和關(guān)節(jié)炎患者也明顯增多，SAM在國(guó)內(nèi)的市場(chǎng)也非常廣闊。據(jù)估算，我國(guó)SAM的年用量應(yīng)在90～100噸左右。而目前對(duì)SAM的大部分研究主要集中在SAM的發(fā)酵及檢測(cè)方面，很少有SAM分離的報(bào)導(dǎo)。因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種易于操作、成本低，安全，可靠的分離方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供了一種從釀酒酵母發(fā)酵液中提取S-腺苷甲硫氨酸的方法，該方法操作方便、工藝簡(jiǎn)單、降低成本、效率高。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：一種從釀酒酵母發(fā)酵液中提取S-腺苷甲硫氨酸的方法，其具體步驟如下：

（1）取釀酒酵母發(fā)酵液，在發(fā)酵液中加入助濾劑，用酸調(diào)節(jié)體系pH，攪拌，將發(fā)酵液過(guò)濾，分別收集濾液和菌體；

（2）將步驟（1）所得的菌體加入容器中，加入提取劑，控制溫度，攪拌，將攪拌后的菌體懸浮液用超聲破碎提取，得提取液；

（3）將步驟（2）中所得提取液，離心、過(guò)濾，收集濾液；

（4）將步驟（3）中收集的濾液和步驟（1）中收集的濾液合并，用有機(jī)溶劑萃取，得萃取液；

（5）將步驟（4）中所得萃取液，先經(jīng)微濾膜過(guò)濾后，再用超濾膜過(guò)濾，超濾濾液旋蒸濃縮，得濃縮液；

（6）將步驟（5）所得濃縮液轉(zhuǎn)移到裝有陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的床層上進(jìn)行吸附，用洗脫劑梯度洗脫，每5～10min收集一次洗脫液，洗脫至洗脫液用紫外分光光度計(jì)沒(méi)有檢出峰為止，合并范圍波長(zhǎng)有檢出峰部分的洗脫液，旋蒸濃縮，得濃縮液；

（7）向步驟（6）中所得濃縮液中加入逆溶劑，直至晶體不再析出，過(guò)濾，得到重結(jié)晶晶體；

（8）將步驟（7）中所得晶體凍干，得粉末。

優(yōu)選步驟（1）中所述助濾劑為硅藻土或珍珠巖；助濾劑與發(fā)酵液質(zhì)量體積比為1%～1.5%g/mL；所述的酸為HCl或H₂SO₄溶液，其摩爾濃度為2～5mol/L，調(diào)節(jié)體系pH范圍為4～6；所述攪拌時(shí)間為15～30min。

優(yōu)選步驟（2）中所述的提取劑為高氯酸、甲醇、乙醇或氯仿；菌體與提取劑質(zhì)量體積比為1：10～15g/mL。優(yōu)選步驟（2）中所述控制溫度為1～8℃，攪拌速度為150～300r/min，攪拌時(shí)間為10～20min；超聲提取中超聲頻率為25～50KHz；功率為100～200W；超聲提取時(shí)間為10～30min。

優(yōu)選步驟（3）中離心轉(zhuǎn)速為8000～10000rpm/min，離心時(shí)間為10～30min。優(yōu)選步驟（4）中的有機(jī)溶劑和步驟（6）中的洗脫劑均為甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿。

優(yōu)選步驟（5）中所述的微孔濾膜孔徑為0.22～0.6μm，材質(zhì)為聚四氟乙烯、聚醚砜或混合纖維樹(shù)脂；所述的超濾膜的孔徑為0.004～0.01μm，材質(zhì)為聚酰胺、聚醚砜或聚碳酸酯。

優(yōu)選步驟（5）中所述濃縮液的體積為超濾后濾液體積的1/100～1/150。

優(yōu)選步驟（6）中所述的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂樹(shù)脂的種類為D113、742、D151或D152型弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的一種；離子柱徑/高比：1：27～30，洗脫劑流速為5～15mL/min；所述紫外分光光度計(jì)范圍波長(zhǎng)為240～270nm；所述濃縮液體積為洗脫液體積的1/50～1/100。

優(yōu)選步驟（7）中所述逆溶劑為正己烷或石油醚。

有益效果：