[發明專利]一種釀酒酵母發酵液中提取S-腺苷甲硫氨酸的方法

有效

• 申請號: 201310191326.2
• 申請日: 2013-05-21
• 公開（公告）號: CN103265595A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 胡永紅;開玉美;楊文革;曹崢;湯天羽;管珺;殷晶晶
• 申請（專利權）人: 南京基準生物科技有限公司
• 主分類號: C07H19/167
• 分類號: C07H19/167;C07H1/08
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;袁正英

1.一種從釀酒酵母發酵液中提取S-腺苷甲硫氨酸的方法，其具體步驟如下：

（1）取釀酒酵母發酵液，在發酵液中加入助濾劑，用酸調節體系pH，攪拌，將發酵液過濾，分別收集濾液和菌體；

（2）將步驟（1）所得的菌體加入容器中，加入提取劑，控制溫度，攪拌，將攪拌后的菌體懸浮液用超聲破碎提取，得提取液；

（3）將步驟（2）中所得提取液，離心、過濾，收集濾液；

（4）將步驟（3）中收集的濾液和步驟（1）中收集的濾液合并，用有機溶劑萃取，得萃取液；

（5）將步驟（4）中所得萃取液，先經微濾膜過濾后，再用超濾膜過濾，超濾濾液旋蒸濃縮，得濃縮液；

（6）將步驟（5）所得濃縮液轉移到裝有陽離子交換樹脂的床層上進行吸附，用洗脫劑梯度洗脫，每5～10min收集一次洗脫液，洗脫至洗脫液用紫外分光光度計沒有檢出峰為止，合并范圍波長有檢出峰部分的洗脫液，旋蒸濃縮，得濃縮液；

（7）向步驟（6）中所得濃縮液中加入逆溶劑，直至晶體不再析出，過濾，得到重結晶晶體；

（8）將步驟（7）中所得晶體凍干，得粉末。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中所述助濾劑為硅藻土或珍珠巖；助濾劑與發酵液質量體積比為1%～1.5%g/mL；所述的酸為HCl或H₂SO₄溶液，其摩爾濃度為2～5mol/L，調節體系pH范圍為4～6；所述攪拌時間為15～30min。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的提取劑為高氯酸、甲醇、乙醇或氯仿；菌體與提取劑質量體積比為1：10～15g/mL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述控制溫度為1～8℃，攪拌速度為150～300r/min，攪拌時間為10～20min；超聲提取中超聲頻率為25～50KHz；功率為100～200W；超聲提取時間為10～30min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3）中離心轉速為8000～10000rpm/min，離心時間為10～30min。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（4）中的有機溶劑和步驟（6）中的洗脫劑均為甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（5）中所述的微孔濾膜孔徑為0.22～0.6μm，材質為聚四氟乙烯、聚醚砜或混合纖維樹脂；所述的超濾膜的孔徑為0.004～0.01μm，材質為聚酰胺、聚醚砜或聚碳酸酯。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（5）中所述濃縮液的體積為超濾后濾液體積的1/100～1/150。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（6）中所述的陽離子交換樹脂樹脂的種類為D113、742、D151或D152型弱酸性陽離子交換樹脂的一種；離子柱徑/高比：1：27～30，洗脫劑流速為5～15mL/min；所述紫外分光光度計范圍波長為240～270nm；所述濃縮液體積為洗脫液體積的1/50～1/100。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（7）中所述逆溶劑為正己烷或石油醚。