[發明專利]可溶性HIV-1整合酶重組蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 201310188288.5
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103275945A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 李春華;李杉;劉斌;何紅秋;段彥華;張小軼;譚建軍;王存新
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/70
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司 11203
• 代理人: 劉萍

1.一種可溶性HIV-1整合酶重組蛋白的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）?將以pET-28a（+）載體為基礎構建的整合酶重組蛋白表達載體轉化入大腸桿菌BL21（DE3）感受態細胞，挑取陽性克隆接種于5?ml含有50?mg/L卡那霉素的LB液體培養基，37?℃搖床振蕩培養12-16?h得到培養物；

（2）?將（1）中的培養物按體積比1?%接種于表達培養基中，37?℃搖床振蕩培養至菌液OD600值達到0.8，加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷至異丙基-β-D-硫代半乳糖苷的終濃度為0.4?mM，37?℃搖床振蕩培養4-5?h得到培養物；所述表達培養基含有15-35?g/L胰蛋白胨，10-20?g/L酵母提取物，2-3?g/L氯化鈉，1?g/L葡萄糖，10-15?g/L甘油，2.05?g/L磷酸氫二鈉，1.27?g/L磷酸二氫鈉，50?mg/L硫酸鎂，60?mg/L卡那霉素；

（3）?將（2）中的培養物離心得到沉淀，每100?mg沉淀用1?ml裂解緩沖液重懸，室溫孵育30?min，反復凍融兩次之后置于冰浴中超聲破碎10?min，4?℃離心收集上清液；所述裂解緩沖液含有20?mM?4-羥乙基哌嗪乙磺酸，1?M氯化鈉，2?mM?β-巰基乙醇，0.3?mg/ml溶菌酶，5?mM咪唑，用氫氧化鈉調pH值至9.0；

（4）?將（3）中的上清液進行鎳瓊脂糖凝膠親和層析，依次用含有20?mM、50?mM、100?mM、250?mM咪唑的洗液進行梯度洗脫，將收集到的含有目的蛋白的洗脫液透析除鹽，并進行分裝。

2.根據權利要求1所述的一種可溶性HIV-1整合酶重組蛋白的制備方法，其特征在于步驟（2）中的表達培養基含有25?g/L胰蛋白胨，15?g/L酵母提取物，2.5?g/L氯化鈉，1?g/L葡萄糖，12?g/L甘油，2.05?g/L磷酸氫二鈉，1.27?g/L磷酸二氫鈉，50?mg/L硫酸鎂，60?mg/L卡那霉素。