[發明專利]含硒重組人血白蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 201310188214.1
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103468769A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 徐東;楊艷群
• 申請（專利權）人: 深圳市亞太興實業有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K1/36;C07K1/18;C07K1/30;C07K1/34
• 代理公司: 深圳中一專利商標事務所 44237
• 代理人: 張全文

1.一種含硒重組人血白蛋白的制備方法，包括如下步驟：

構建含重組人血白蛋白基因的畢赤酵母工程菌；

將所述畢赤酵母工程菌進行發酵培養；所述發酵培養過程中向培養基中加入體積分數為0.001%～0.05%的亞硒酸鈉；

將發酵培養的產物純化，得到含硒重組人血白蛋白。

2.如權利要求1所述的含硒重組人血白蛋白的制備方法，其特征在于，所述發酵培養步驟為：

將所述畢赤酵母工程菌在30℃條件下用YPD培養基培養12～18h；

將種子液轉移至BMGY培養基中，在溫度為28℃，pH值為6的條件下培養，檢測菌液OD₆₀₀為0.6時向培養基中加入甲醇溶液；

將溫度調整至28℃，PH值調節為5～9發酵培養72～120小時，每隔12小時向培養基中加入甲醇和甘油混合溶液及體積分數為0.001%～0.05%的亞硒酸鈉。

3.如權利要求2所述的含硒重組人血白蛋白的制備方法，其特征在于，所述甘油溶液的質量濃度為0.01%～5%，所述甲醇溶液的質量濃度為0.01%～5%。

4.如權利要求1、2或3所述的含硒重組人血白蛋白的制備方法，其特征在于，所述純化步驟前還包括如下滅活步驟：

將發酵培養后的溶液離心，收集上清液；

將所述上清液在溫度為30～80℃條件下熱處理1～5小時，離心處理后收集上清液，得到熱處理后上清液。

5.如權利要求4所述的含硒重組人血白蛋白的制備方法，其特征在于，所述純化步驟如下：

將所述熱處理后上清液經過（NH₄）₂SO₄沉淀、離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾分離純化及使用相對分子量為5000～100,000中空纖維超濾膜進行脫鹽處理，得到含硒重組人血白蛋白。