[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)水體中沙門氏菌濃度的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310188135.0
• 申請(qǐng)日: 2013-05-21
• 公開（公告）號(hào): CN103278543A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂保櫻;唐艷平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 桂林市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所
• 主分類號(hào): G01N27/26
• 分類號(hào): G01N27/26
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 45107
• 代理人: 唐智芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物含量的測(cè)定方法，具體涉及一種快速檢測(cè)水體中沙門氏菌濃度的方法。

背景技術(shù)

沙門氏菌屬腸道細(xì)菌科，包括那些引起食物中毒，導(dǎo)致胃腸炎、傷寒和副傷寒的細(xì)菌。沙門氏菌病除可感染人外，還可感染很多動(dòng)物包括哺乳類、鳥、爬行類、魚、兩棲類及昆蟲。人畜感染后可呈無(wú)癥狀帶菌狀態(tài)，也可表現(xiàn)為有臨床癥狀的致死疾病，它可能加重病態(tài)或死亡率，或者降低動(dòng)物的繁殖生產(chǎn)力。

目前,對(duì)水體中沙門氏菌的濃度一般采用傳統(tǒng)的常規(guī)檢測(cè)方法,主要是通過(guò)增菌、分離、生化鑒定完成檢測(cè),如平板計(jì)數(shù)法等，這些方法也是國(guó)內(nèi)外大多數(shù)檢測(cè)機(jī)構(gòu)使用的方法。但是這些方法或多或少存在著檢測(cè)周期長(zhǎng)、程序復(fù)雜、所需試劑繁多等不足，如果樣品量大時(shí)，這些技術(shù)則很難滿足快速計(jì)數(shù)沙門氏菌的需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種快速檢測(cè)水體中沙門氏菌濃度的方法。該方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期短。

本發(fā)明的原理為：基于BDD電極良好的電化學(xué)功能，將其置于含沙門氏菌的電解質(zhì)溶液中，BDD電極表面占據(jù)活性位點(diǎn)的羥基自由基將會(huì)引起沙門氏菌細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，從而在BDD電極上產(chǎn)生氧化電流，根據(jù)氧化電流的變化與沙門氏菌數(shù)量變化的關(guān)系,實(shí)現(xiàn)對(duì)水體中沙門氏菌濃度的檢測(cè)。

本發(fā)明所述的快速檢測(cè)水體中沙門氏菌濃度的方法，包括以下步驟：

1)獲得多份不同已知濃度的沙門氏菌溶液；

2)確定沙門氏菌與摻硼金剛石膜電極(BDD電極)響應(yīng)電流的依從關(guān)系

采用CHI660D電化學(xué)工作站用電化學(xué)計(jì)時(shí)電流的方法快速檢測(cè)沙門氏菌的濃度，以摻硼金剛石膜電極為工作電極，鉑絲電極為對(duì)電極，以飽和甘汞電極為參比電極，設(shè)置工作電極的檢測(cè)電位為0.9～1.15V，電解池中為pH7.2～7.6的磷酸-磷酸鹽緩沖溶液；將上述步驟1)獲得的多份沙門氏菌溶液逐一進(jìn)樣，記錄每次進(jìn)樣時(shí)摻硼金剛石膜電極的響應(yīng)電流的電流值，根據(jù)全部進(jìn)樣的沙門氏菌液濃度和與其對(duì)應(yīng)響應(yīng)電流的電流值作曲線，得到響應(yīng)電流-沙門氏菌濃度曲線，該曲線為一直線，確定沙門氏菌與摻硼金剛石膜電極響應(yīng)電流的依從關(guān)系為線性關(guān)系；

3)沙門氏菌濃度的快速檢測(cè)

3.1)按步驟2)中的檢測(cè)條件，將待測(cè)水體樣品進(jìn)樣，記錄摻硼金剛石膜電極的響應(yīng)電泳的電流值；

3.2)利用步驟2)確定的響應(yīng)電流-沙門氏菌濃度曲線，結(jié)合上述步驟3.1)記錄的電流值讀出該電流值對(duì)應(yīng)的沙門氏菌濃度，該濃度即為待測(cè)水體的沙門氏菌濃度。

上述方法中：

步驟2)中，所述工作電極的檢測(cè)電位優(yōu)選為0.95～1.05V，最佳的檢測(cè)電位為1.0V；電解池中磷酸-磷酸鹽緩沖溶液的pH值優(yōu)選為7.3～7.5，最好是采用pH7.4的磷酸-磷酸鹽緩沖溶液。

步驟1)中，獲得多份不同已知濃度的沙門氏菌溶液的操作可以按現(xiàn)有常規(guī)方法進(jìn)行，優(yōu)選按以下操作進(jìn)行：取沙門氏菌菌液用無(wú)菌生理鹽水稀釋，分多次取適量稀釋液分別注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中，計(jì)算各培養(yǎng)瓶中沙門氏菌的菌落數(shù)(計(jì)算時(shí)采用現(xiàn)有常規(guī)方法)，得到多份不同已知濃度的沙門氏菌溶液。為了使沙門氏菌在后序檢測(cè)時(shí)具有更好的活性，優(yōu)選在上述操作中增加培養(yǎng)增菌的操作，在此基礎(chǔ)上獲得多份不同已知濃度的沙門氏菌溶液的具體操作為：取沙門氏菌菌液用無(wú)菌生理鹽水稀釋，分多次取適量稀釋液分別注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中，將各個(gè)培養(yǎng)瓶中的稀釋液分別涂布于LB平板上，于35～37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,通過(guò)計(jì)算各個(gè)LB平板上沙門氏菌的菌落數(shù)獲得各培養(yǎng)瓶中沙門氏菌的菌落數(shù)，從而得到多份不同已知濃度的沙門氏菌溶液。該步驟中，用無(wú)菌生理鹽水稀釋沙門氏菌菌液時(shí)，稀釋的倍數(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相同，通常是將沙門氏菌液用無(wú)菌生理鹽水稀釋至約10⁶個(gè)/ml,以便于后續(xù)沙門氏菌菌落數(shù)的計(jì)數(shù)。

上述方法中，所述的響應(yīng)電流-沙門氏菌濃度曲線用于擬合表達(dá)摻硼金剛石膜電極的響應(yīng)電流與沙門氏菌濃度依從關(guān)系的公式，擬合得到的公式為ΔI＝Kx，其中ΔI為計(jì)時(shí)電流變化，單位為μA，K為常數(shù)，x為沙門氏菌濃度，單位為cfu/mL。

在上述檢測(cè)條件下，本方法檢測(cè)水體中沙門氏菌的檢出限為1000cfu/mL。