[發明專利]一種高效益生菌及其制備方法在審
| 申請號： | 201310188066.3 | 申請日： | 2013-05-20 |
| 公開（公告）號： | CN104178441A | 公開（公告）日： | 2014-12-03 |
| 發明（設計）人： | 劉志華;秦環龍;汪建平 | 申請（專利權）人： | 劉志華 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;A61K35/74;A01P1/00;C12R1/225;C12R1/245;C12R1/23;C12R1/25;C12R1/24;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產權代理有限公司 31253 | 代理人： | 馮子玲 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 效益 及其 制備 方法 | ||
1.一種高效益生菌，其特征在于，所述高效益生菌為高表達I58基因的乳酸桿菌。
2.根據權利要求1所述高效益生菌，其特征在于，將含有I58基因的重組載體轉化乳酸桿菌中，得到高表達I58基因的乳酸桿菌。
3.根據權利要求1或2所述高效益生菌，其特征在于，所述乳酸桿菌選自大腸桿菌保加利亞乳桿菌、干酪乳酸菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、雙歧桿菌、短乳桿菌。
4.一種制備權利要求1所述高效益生菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1，依據I58基因序列設計擴增引物，經PCR克隆I58基因片段；
步驟2，將所得I58基因片段克隆至表達載體中，獲得重組載體；
步驟3，轉化所述重組載體至感受態的乳酸桿菌中，得到高效益生菌。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，在擴增引物設計過程中，使所設計的上游引物在I58基因上游引入Bgl?Ⅱ酶切位點；使所設計的下游引物在I58基因下游引入Xho?Ⅰ酶切位點。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1中所述擴增引物如下：
上游引物：5’-atcAAGCTTTTTTCAGTTCAAAATGGTTA-3’；
下游引物：5’-atcctcgagAGTTTTCATCTTAACAACCT-3’；
其中所述上游引物中atc為Bgl?Ⅱ酶切位點，所述下游引物中atcctcgag為Xho?Ⅰ酶切位點。
7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述表達載體為含有Bgl?Ⅱ酶切位點和Xho?Ⅰ酶切位點的表達載體。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述表達載體為pET32載體。
9.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述乳酸桿菌選自保加利亞乳桿菌、干酪乳酸菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、雙歧桿菌、短乳桿菌。
10.一種如權利要求1所述高效益生菌在制備治療腸道菌群失調引起的疾病的藥物中的應用。
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