[發明專利]用于快速檢測新型H7N9亞型禽流感病毒的多重熒光RT-PCR試劑盒及方法有效
| 申請號： | 201310187844.7 | 申請日： | 2013-05-20 |
| 公開（公告）號： | CN103276110A | 公開（公告）日： | 2013-09-04 |
| 發明（設計）人： | 羅寶正;莫秋華;薄清如;徐海聶;楊澤;李儒曙;廖秀云;沙才華 | 申請（專利權）人： | 珠海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 譚英強 |
| 地址： | 519015 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 快速 檢測 新型 h7n9 禽流感 病毒 多重 熒光 rt pcr 試劑盒 方法 | ||
1.用于快速檢測新型H7N9亞型禽流感病毒的多重熒光RT-PCR引物和探針，其包括一組用于檢測H7亞型禽流感病毒的特異性引物和探針和一組用于檢測N9亞型禽流感病毒的特異性引物和探針，其中，
用于檢測H7亞型禽流感病毒的引物和探針如下所示：
H7F：TAGAATACAGATTGACCCAGTCAAA（SEQ?ID?NO:1），
H7R：CCCCGAAGCTAAACCAAAGT（SEQ?ID?NO:2），
H7P：FAM-TAAGCAGCGGCTACAAAGATGTGA-BHQ1（SEQ?ID?NO:3）；
用于檢測N9亞型禽流感病毒的引物和探針如下所示：
N9F：GGAATAGCAAACCTAGGATTGAA（SEQ?ID?NO:4）；
N9R：GGTTGTGAGTGTGAGCAATTG（SEQ?ID?NO:5）；
N9P：HEX-TAGGACTGCATCTAAAACCGGGCT-BHQ1（SEQ?ID?NO:6）。
2.一種用于快速檢測新型H7N9亞型禽流感病毒的多重熒光RT-PCR試劑盒，其含有權利要求1所述的引物和探針。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有反轉錄酶、Tap聚合酶、RT-PCR反應緩沖液、陽性標準品和陰性標準品。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性標準品為含有H7N9亞型禽流感病毒的血凝素抗原（HA）基因序列（GenBank：KC853766）的重組質粒和含有神經氨酸酶抗原(NA)基因序列（GenBank：KC853765）的重組質粒。
5.一種快速檢測新型H7N9亞型禽流感病毒的多重熒光RT-PCR方法，包括如下步驟：
（1）提取待檢樣品RNA；
（2）以待檢樣品RNA為模板，利用權利要求1所述的引物和探針進行RT-PCR反應；
（3）結果判斷：根據擴增曲線，對照陽性標準品和陰性標準品的擴增結果，判斷樣品是否為新型H7N9亞型禽流感病毒。
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