[發明專利]一種鑒定水稻稻瘟病生防菌的方法

無效

• 申請號: 201310187418.3
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103276044A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 王琦;沙月霞;李燕;付學池
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/07;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種鑒定水稻稻瘟病生防菌的方法。?

背景技術

稻瘟病是世界水稻生產的重要病害之一，該病分布廣泛，全世界約有80余個國家和地區發生此病，我國南北稻區也均有發生。病害流行地區，一般減產10-20%，嚴重時可達40-50%，特別重的田塊甚至顆粒無收。目前，水稻抗瘟性品種的利用和化學農藥的使用仍是防治稻瘟病行之有效的措施，但因抗瘟品種的單一化、稻瘟病菌生理小種遺傳的復雜性和致病性的多樣性以及化學農藥的毒性和病原菌的抗藥性，水稻抗瘟性品種和化學農藥使用在生產上都受到一定的限制。因此，水稻稻瘟病的生物防治特別是生物農藥的研究與開發是水稻生產可持續發展的需要。?

目前對稻瘟病防治有效的抗生素：春雷霉素、春日霉素、Kasugamycin,滅瘟素-S、Blasti-cidin、慶豐霉素、891，其微生物來源分別是春日鏈霉菌、Streptomyces、kasugensisUmezawa、灰色產色鏈霉菌S，Griseochromogenes?Fukunaga、慶豐鏈霉菌、放線菌。來自于芽胞桿菌的微生物源生物農藥在防治水稻稻瘟病上發揮了重要的作用。彭化賢等從水稻根際得到208株對稻瘟菌有較好的拮抗作用的細菌菌株，抑菌圈直徑在20mm以上的就有65株，包括蠟狀芽胞桿菌和枯草芽胞桿菌在內的一些芽胞桿菌屬細菌防效較好。稻瘟病生防菌快速高效的篩選方法是影響生防菌發展的重要因素。?

常規的篩選方法過程復雜，檢測分析時間長，篩選結果與大田實際防效差異較大，篩選利用率較低。?

發明內容

本發明的目的是提供一種鑒定或輔助鑒定待測菌是否抗稻瘟病菌的方法。?

本發明提供的方法，包括如下步驟：?

1）將牙簽置于鋪設有濕潤濾紙的培養容器中，再將定殖有待測菌的植物葉片段置于所述牙簽上，使所述牙簽隔離所述定殖有待測菌的植物葉片段和所述濕潤濾紙；培養，得到培養后葉片；?

所述定殖有待測菌的植物葉片段按照如下方法制備：將植物葉片段置于待測菌的發酵液中，定殖培養，得到定殖有待測菌的植物葉片段；?

2）先用另外的牙簽刺傷所述培養后葉片的表面且不傷及葉片角質層，再將稻瘟病菌的孢子懸浮液接種到刺傷部位，得到接種后葉片；?

3）繼續培養所述接種后葉片，得到待觀察葉片，觀察所述待觀察葉片，若所述待觀察葉片無褐點或病斑，則待測菌抗或候選抗稻瘟病菌，若所述待觀察葉片有褐點?或有病斑，則待測菌不抗或候選不抗稻瘟病菌。?

上述方法中，在步驟1）和步驟2）之間，還包括如下步驟：棄去所述培養容器中的牙簽。?

上述方法中，步驟1）中，所述待測菌的發酵液中的菌的濃度（在本發明的實施例中是芽孢量）為（1.0-2.0）×10⁸CFU/ml；?

步驟2）中，所述稻瘟病菌的孢子懸浮液中的孢子濃度為（1.0-2.0）×10⁶CFU/ml。?

上述方法中，步驟1）中，所述待測菌的發酵液中的菌的濃度為1×10⁸CFU/ml。?

步驟2）中，所述稻瘟病菌的孢子懸浮液中的孢子濃度為1×10⁶CFU/ml。?

上述方法中，步驟1）和步驟3）中，所述培養和所述繼續培養的條件均如下:28℃，濕度70%，每天光照時間4h，光照強度為4400Lux；?

所述培養的時間為20h；?

所述繼續培養時間為24-96h，所述繼續培養時間具體為48h。?

上述方法中，步驟1）中，所述定殖培養的條件為200rpm/min，28℃振蕩培養1-1.5h；所述定殖培養的條件具體為200rpm/min，28℃振蕩培養1h。?

上述方法中，步驟1）中，所述將定殖有待測菌的植物葉片段置于所述牙簽上為將所述定殖有待測菌的植物葉片段的上表面向上置于所述牙簽上；?

所述鋪設有濕潤濾紙的培養容器按照如下方法制備：先在培養容器中鋪設濾紙，再用無菌水濕潤所述濾紙，得到鋪設有濕潤濾紙的培養容器。?

植物葉片有上表面（腹面）和下表面（背面）之分。?

上述方法中，所述葉片段的長為5cm、寬為0.8-1.2cm；?

所述葉片段具體來源于生長期為真葉期4-6葉期葉片。?

上述方法中，所述植物為雙子葉植物或單子葉植物；所述單子葉植物為水稻，具體品種為麗江新團黑谷。?

所述待測菌為芽胞桿菌；?