[發(fā)明專利]一種鑒定水稻稻瘟病生防菌的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310187418.3
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103276044A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王琦;沙月霞;李燕;付學池
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/07;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種鑒定或輔助鑒定待測菌是否抗稻瘟病菌的方法，包括如下步驟：

1）將牙簽置于鋪設(shè)有濕潤濾紙的培養(yǎng)容器中，再將定殖有待測菌的植物葉片段置于所述牙簽上，使所述牙簽隔離所述定殖有待測菌的植物葉片段和所述濕潤濾紙；培養(yǎng)，得到培養(yǎng)后葉片；

所述定殖有待測菌的植物葉片段按照如下方法制備：將植物葉片段置于待測菌的發(fā)酵液中，定殖培養(yǎng)，得到定殖有待測菌的植物葉片段；

2）先用另外的牙簽刺傷所述培養(yǎng)后葉片的表面且不傷及葉片角質(zhì)層，再將稻瘟病菌的孢子懸浮液接種到刺傷部位，得到接種后葉片；

3）繼續(xù)培養(yǎng)所述接種后葉片，得到待觀察葉片，觀察所述待觀察葉片，若所述待觀察葉片無褐點或病斑，則待測菌抗或候選抗稻瘟病菌，若所述待觀察葉片有褐點或有病斑，則待測菌不抗或候選不抗稻瘟病菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

在步驟1）和步驟2）之間，還包括如下步驟：棄去所述培養(yǎng)容器中的牙簽。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述待測菌的發(fā)酵液中的菌的濃度為（1.0-2.0）×10⁸CFU/ml；

步驟2）中，所述稻瘟病菌的孢子懸浮液中的孢子濃度為（1.0-2.0）×10⁶CFU/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述待測菌的發(fā)酵液中的菌的濃度為1×10⁸CFU/ml。

步驟2）中，所述稻瘟病菌的孢子懸浮液中的孢子濃度為1×10⁶CFU/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1）和步驟3）中，所述培養(yǎng)和所述繼續(xù)培養(yǎng)的條件均如下:28℃，濕度70%，每天光照時間4h，光照強度為4400Lux；

所述培養(yǎng)的時間為20h；

所述繼續(xù)培養(yǎng)時間為24-96h，所述繼續(xù)培養(yǎng)時間具體為48h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述定殖培養(yǎng)的條件為200rpm/min，28℃振蕩培養(yǎng)1-1.5h；所述定殖培養(yǎng)的條件具體為200rpm/min，28℃振蕩培養(yǎng)1h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：

步驟1）中，所述將定殖有待測菌的植物葉片段置于所述牙簽上為將所述定殖有待測菌的植物葉片段的上表面向上置于所述牙簽上；

所述鋪設(shè)有濕潤濾紙的培養(yǎng)容器按照如下方法制備：先在培養(yǎng)容器中鋪設(shè)濾紙，再用無菌水濕潤所述濾紙，得到鋪設(shè)有濕潤濾紙的培養(yǎng)容器。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：

所述葉片段的長為5cm、寬為0.8-1.2cm；

所述葉片段具體來源于生長期為真葉期4-6葉期葉片。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的方法，其特征在于：所述植物為雙子葉植物或單子葉植物；

所述待測菌為芽胞桿菌；

所述稻瘟病菌為P131（Magnaporthe?oryzae?P131)。