[發明專利]一種提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法

有效

• 申請號: 201310186510.8
• 申請日: 2013-05-16
• 公開（公告）號: CN103275920A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 陳衛;張秋香;趙山山;劉小鳴;王剛;田豐偉;郝光飛;趙建新;張灝
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/38
• 分類號: C12N1/38;C12N1/20;C12R1/25;C12R1/245;C12R1/23;C12R1/225;C12R1/01
• 代理公司: 無錫互維知識產權代理有限公司 32236
• 代理人: 王愛偉

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法。

背景技術

乳酸菌（Lactic?Acid?Bacteria，LAB）是人類應用最早的細菌之一，廣泛存在于人、畜、禽的腸道、食品、飲料及少數臨床藥品中，早在公元前三世紀，我們的祖先就用它來制作乳制品、肉制品及腌菜。乳酸菌不僅可以提高食品的營養價值，改善食品風味，提高食品附加值，還可以調節機體胃腸道正常菌群、保持微生態平衡，提高食物消化率，降低血清膽固醇，抑制腸道內腐敗菌生長、繁殖及腐敗產物的產生，刺激組織發育，從而對機體的營養狀態、生理功能、細胞感染、藥物效應、毒性反應、免疫反應、腫瘤發生和衰老過程等產生作用。

益生乳酸菌必須在胃腸道中保持一定的數量，才能夠在機體內發揮益生作用，而成功的粘附在腸道上皮細胞是乳酸菌在腸道中定殖、增殖的第一步。乳酸菌的粘附能力與多種因素有關，如：粘附素、細胞表面蛋白、莢膜多糖等。乳酸菌在工業生產中常常會遇到高鹽環境，如在發酵奶酪、發酵蔬菜、魚及肉制品，我們通過對分離自泡菜的植物乳桿菌ST-III耐鹽轉錄組的分析發現，在含有鹽的培養基中培養的植物乳桿菌ST-III細胞產生了鹽應激反應，其粘附蛋白、細胞表面蛋白及莢膜多糖的表達量均比在不含鹽的培養基中培養時有了顯著的提高；國外也有研究報道，膽鹽引起的應激反應提高了脆弱擬桿菌對腸道上皮細胞的粘附能力（Bile?salts?enhance?bacterial?co-aggregation,bacterial-intestinal?epithelial?cell?adhesion,biofilm?formation?and?antimicrobial?resistance?of?Bacteroides?fragilis.Microbial?pa?thogenesis.2007.43,78-87.），但鹽引起的鹽應激反應是否可以提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞的能力并沒有報道。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述和/或現有提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞的能力的方式方法，提出了本發明。

因此，本發明其中一個目的是通過對乳酸菌在含鹽的培養基中培養，為提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞的能力提供一種新方法。

為解決上述技術問題，根據本發明的一個方面，本發明提供了如下技術方案：一種提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法，包括以下步驟：（1）乳桿菌或乳球菌種子液的培養；（2）將所述種子液以3%-4%（v/v）接種量接種到含有一定濃度鹽的液體培養基中，靜置培養；（3）離心，獲得菌體。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（1）中將乳桿菌在MRS固體平板上劃線，37℃-42℃倒置培養至長出單菌落，挑取單菌落接種到MRS液體培養基中，37℃-42℃靜置培養6h-10h。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（1）中將乳球菌在GM17固體平板上劃線，30℃-32℃倒置培養至長出單菌落，挑取單菌落接種到GM17液體培養基中，30℃-32℃靜置培養6h-10h。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（1）中乳桿菌包括植物乳桿菌、干酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌及羅伊氏乳桿菌中的一種或幾種。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（1）中乳球菌包括乳酸乳球菌乳脂亞種和/或乳酸乳球菌乳酸亞種。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（2）中在含有一定濃度鹽的液體培養基中培養，其中鹽指的是鈉鹽。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（2）中在含有一定濃度鹽的液體培養基中培養，其中一定濃度范圍為2%-10%。

作為本發明所述提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞能力的方法的一種優選方案，其中：所述步驟（3）中離心速度控制在4000-6000rpm。

本發明研究了鹽應激反應對乳酸菌粘附腸道上皮細胞HT-29的能力的影響，提高了乳酸菌粘附腸道上皮細胞的能力，實驗重復性好，為提高乳酸菌粘附腸道上皮細胞的能力提供了一種新方法。