[發(fā)明專(zhuān)利]全氟三乙胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310185810.4
• 申請(qǐng)日: 2013-05-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103263695A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅卓荊;黃景輝;馬騰;王宇清;朱澍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61L27/50
• 分類(lèi)號(hào): A61L27/50;A61L27/24;A61L27/20;A61L27/38
• 代理公司: 西安弘理專(zhuān)利事務(wù)所 61214
• 代理人: 羅笛

1.全氟三乙胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管制備方法，其特征在于，具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1、制備多微孔可降解膠原-殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管；

步驟2、采用京尼平和乙醇混合溶液對(duì)經(jīng)步驟1制得的多微孔可降解膠原-殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行交聯(lián)及消毒處理；

步驟3、種子細(xì)胞的培養(yǎng)與純化；

步驟4、制備無(wú)菌的全氟三乙胺乳液；

步驟5、將經(jīng)步驟4配制的全氟三乙胺乳液與經(jīng)步驟3得到的種子細(xì)胞混合，并用雙筒等量注射器注射到步驟2得到的消毒后的多微孔可降解膠原-殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)，得到本發(fā)明的全氟三丁胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的全氟三乙胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管制備方法，其特征在于，所述步驟1具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1.1、分別稱(chēng)取I型膠原蛋白和殼聚糖，I型膠原蛋白和殼聚糖的質(zhì)量比為1～8:1；

步驟1.2、將經(jīng)步驟1.1稱(chēng)取的I型膠原蛋白放入冰醋酸中，將殼聚糖放入配制的醋酸溶液中，待I型膠原蛋白和殼聚糖都充分溶解后形成兩種懸濁液，混合兩種懸濁液配制出I型膠原-殼聚糖凝膠狀懸濁液；

步驟1.3、將經(jīng)步驟1.2.4配制的I型膠原-殼聚糖凝膠狀懸濁液倒入神經(jīng)導(dǎo)管成形模具中，進(jìn)行注模和冷淋固形處理；

步驟1.4、制備出多微孔可降解膠原-殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的全氟三乙胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管制備方法，其特征在于，所述步驟1.2具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1.2.1、配制質(zhì)量體積百分比濃度為140mg/ml醋酸溶液；

步驟1.2.2、按步驟1.1中稱(chēng)取的I型膠原蛋白的質(zhì)量取冰醋酸，每克I型膠原蛋白加入10ml的冰醋酸溶液，將量取的冰醋酸與I型膠原蛋白混合，經(jīng)22h～26h的溶解處理，制得I型膠原蛋白和冰醋酸的懸濁液；

按步驟1.1中稱(chēng)取的殼聚糖的質(zhì)量取步驟1.2.1中配制的醋酸溶液，每克的殼聚糖加入37ml的冰醋酸溶液，將量取的醋酸溶液與殼聚糖混合，經(jīng)22h～26h的溶解處理，制得殼聚糖和醋酸的懸濁液；

步驟1.2.3、將經(jīng)步驟1.2.2得到的I型膠原蛋白和醋酸的懸濁液與殼聚糖和醋酸的懸濁液混合在一起，于2℃～6℃條件下，恒溫?cái)嚢杼幚?0min～110min，得到混合懸濁液；

步驟1.2.4、將經(jīng)步驟1.2.3得到的混合懸濁液先進(jìn)行抽真空處理，之后再靜置10h～14h，得到I型膠原-殼聚糖凝膠狀懸濁液。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的全氟三乙胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管制備方法，其特征在于，所述步驟1.3具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1.3.1、將經(jīng)步驟1.2.4得到的I型膠原-殼聚糖凝膠狀懸濁液注入神經(jīng)導(dǎo)管成形模具中，以小鐵夾固定神經(jīng)導(dǎo)管成形模具的兩端；

步驟1.3.2、在微型調(diào)速儀作用下，以垂釣的方式將神經(jīng)導(dǎo)管成形模具順軸向以1.2×10^-3m/s的速度緩慢浸入液氮中，對(duì)注入神經(jīng)導(dǎo)管成形模具中的I型膠原-殼聚糖凝膠狀懸濁液進(jìn)行冷淋固形處理，待神經(jīng)導(dǎo)管成形模具完全浸入液氮后，繼續(xù)在液氮中保留10h～14h；

步驟1.3.3、經(jīng)步驟1.3.2，將神經(jīng)導(dǎo)管成形模具連同內(nèi)部注入的I型膠原-殼聚糖凝膠狀懸濁液一同轉(zhuǎn)入-90℃～-70℃的冰箱中冷藏。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的全氟三乙胺乳液與種子細(xì)胞復(fù)合的神經(jīng)導(dǎo)管制備方法，其特征在于，所述步驟1.4具體按照以下步驟實(shí)施：

步驟1.4.1、將神經(jīng)導(dǎo)管成形模具從-90℃～-70℃的冰箱取出，迅速去除神經(jīng)導(dǎo)管成形模具兩端的鐵夾和銅管；

步驟1.4.2、經(jīng)步驟1.4.1，將神經(jīng)導(dǎo)管成形模具放置于預(yù)冷好的冷凍干燥機(jī)中凍干46h～50h，其中冷凍干燥機(jī)設(shè)置的預(yù)冷參數(shù)為：-60℃、100mtorr；

步驟1.4.3、將經(jīng)步驟1.4.2凍干處理后的神經(jīng)導(dǎo)管成形模先具放置于真空狀態(tài)下并升溫至0℃，保持5.5h～6.5h，之后再升溫至20℃～24℃，保持30min～60min，解除真空狀態(tài)，最后升至常溫；

步驟1.4.4、經(jīng)步驟1.4.2和步驟1.4.3凍干成形處理后，將神經(jīng)導(dǎo)管從神經(jīng)導(dǎo)管成形模具中取出，按不同的要求，裁剪成不同長(zhǎng)度的神經(jīng)導(dǎo)管，即制備得到多微孔可降解膠原-殼聚糖神經(jīng)導(dǎo)管。