[發明專利]一種快速檢測食品中鴨源性成分的方法

有效

• 申請號: 201310185234.3
• 申請日: 2013-05-16
• 公開（公告）號: CN103224989A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 黃明;程欣;黃繼超;周興虎;楊靜
• 申請（專利權）人: 南京吉泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 邱興天

1.?一種快速檢測食品中鴨源性成分的方法，其特征在于：為TaqMan探針熒光定量PCR方法，具體包括：以含有待檢DNA模板、含有陽性擴增內標DNA的重組質粒、陽性擴增內標DNA的TaqMan探針、鴨的IL-2基因擴增引物和TaqMan探針，進行熒光定量PCR反應；應用ABI?7500?Software?SDS1.4對結果進行分析處理，以Ct值小于36的擴增作為檢測的陽性結果；

其中，

陽性擴增內標DNA的序列如SEQ?ID?NO.1所示，陽性擴增內標DNA的TaqMan探針為：5’-CY5-ATGACCAAAGCCTCCGGGCGTAG-BHQ3-3’；

鴨的IL-2基因擴增上游引物序列為：5’-GGAGCACCTCTATCAGAGAAAGACA-3’，下游引物序列為：5’-GTGTGTAGAGCTCAAGATCAATCCC-3’，探針為5’-FAM-TGGGAACAAGCATGAATGTAAGTGGATGGT-BHQ1-3’。

2.根據權利要求1所述的快速檢測食品中鴨源性成分的方法，其特征在于：所述含有陽性擴增內標DNA的重組質粒，由以下方法制備：

使用DNA隨機生成軟件產生一段DNA序列，并確保在NCBI中Blast后沒有出現與所述DNA序列同源的DNA片段；先在所述DNA序列上、下游分別連接上鴨的擴增引物序列，然后分別連接載體pMD19-T?Simple，再轉化感受態細胞E.coli?Competent?Cell?JM109，小量提取并測序驗證，得到含有陽性擴增內標DNA的重組質粒。

3.根據權利要求1所述的快速檢測食品中鴨源性成分的方法，其特征在于：所述TaqMan探針熒光定量PCR方法，20μL反應體系為：2μL待檢模板DNA，2μL含有陽性擴增內標DNA的重組質粒，10μL?Premix?Ex?Taq，0.8μL鴨DNA探針溶液，0.8μL擴增內標探針溶液，0.4μL?ROX校正溶液，上、下游引物各為0.4μL，滅菌蒸餾水補足。

4.根據權利要求1所述的快速檢測食品中鴨源性成分的方法，其特征在于：所述TaqMan探針熒光定量PCR方法，反應條件為：95℃，30s；?95℃，5s，60℃，34s，40個循環。