[發(fā)明專利]一種降低金線蓮組培污染率的方法及其培養(yǎng)基配方

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310184747.2
• 申請(qǐng)日: 2013-05-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103250644A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵清松;胡潤(rùn)淮;王瑩;季宗富;易浩君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江農(nóng)林大學(xué);杭州韻和生物科技有限公司;杭州語(yǔ)萊農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司 33101
• 代理人: 王洪新

1.一種降低金線蓮組培污染率的培養(yǎng)基配方，其特征在于所述的培養(yǎng)基配方為1/2MS、香蕉40～60g/L、活性炭0.8～1.2g/L、NAA0.8～1.2mg/L、6-BA0.4～0.8mg/L、蔗糖22～30g/L、瓊脂粉5.5～6.5g/L、洋蔥40～60g/L、螃蟹殼粉10～20g/L。

2.如權(quán)利要求1所述的一種降低金線蓮組培污染率的培養(yǎng)基配方，其特征在于所述的培養(yǎng)基配方為1/2MS、香蕉50g/L、活性炭1.0g/L、NAA1.0mg/L、6-BA0.6mg/L、蔗糖26g/L、瓊脂粉6.0g/L、洋蔥50g/L、螃蟹殼粉15g/L。

3.一種利用權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基配方降低金線蓮組培污染率的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）接種室消毒：每月用艾葉和雷公藤對(duì)接種室薰蒸一次進(jìn)行滅菌消毒；每周用臭氧發(fā)生器對(duì)接種室進(jìn)行一次滅菌消毒；

2）培養(yǎng)室消毒：每月用艾葉和雷公藤對(duì)培養(yǎng)室薰蒸一次進(jìn)行滅菌消毒；每月用臭氧發(fā)生器對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行一次滅菌消毒；

3）培養(yǎng)基配制：以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按照配方進(jìn)行配制，混勻后將培養(yǎng)基的PH值調(diào)節(jié)至5.8～6.0；將配制好的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中后加蓋；

4）培養(yǎng)基和接種器具滅菌：采用高壓蒸汽法對(duì)培養(yǎng)基和接種器具進(jìn)行滅菌。

5）外植體接種：

當(dāng)采用自然生長(zhǎng)的金線蓮植株作為外植體時(shí)，用自來(lái)水洗凈金線蓮，轉(zhuǎn)入70%乙醇漂洗30s，再用0.1%升汞滅菌10min，無(wú)菌水反復(fù)沖洗5～6次，瀝干水分，剪成帶1個(gè)節(jié)莖段，接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上；

當(dāng)采用金線蓮組培無(wú)菌苗作為外植體時(shí)，將金線蓮剪成帶1個(gè)節(jié)莖段，接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上；

6）組培苗培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶移入培養(yǎng)室，培養(yǎng)條件：溫度24±2℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1800～2000lx，培養(yǎng)時(shí)間四個(gè)月。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種降低金線蓮組培污染率的方法，其特征在于：接種前，接種室和超凈工作臺(tái)開(kāi)紫外燈照射消毒30min，然后打開(kāi)超凈工作臺(tái)吹風(fēng)20min，用新潔爾滅擦拭臺(tái)面后使用；污染的培養(yǎng)瓶須經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌后方可使用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種降低金線蓮組培污染率的方法，其特征在于：所述的培養(yǎng)室應(yīng)定期打掃，每天噴灑75%的酒精除塵，陰雨天開(kāi)空調(diào)除濕，以保持干凈和室內(nèi)空氣干燥；發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)室有污染的培養(yǎng)瓶應(yīng)立即滅菌處理，以防擴(kuò)散。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種降低金線蓮組培污染率的方法，其特征在于：所述步驟4）滅菌時(shí)要保證滅菌鍋內(nèi)部清潔，內(nèi)部的冷氣排盡，裝填的滅菌物不能堆放過(guò)滿，保持滅菌鍋溫度在121℃、105kPa、20min；培養(yǎng)基滅菌后，先放入緩沖間，抽取樣品放在培養(yǎng)室培養(yǎng)2～3d，若培養(yǎng)基表面和內(nèi)部均無(wú)任何細(xì)菌痕跡和真菌菌斑，方可使用；刀、剪、鑷子等金屬用具在接種前用75%酒精棉球擦拭，再在帶有石英砂的消毒器內(nèi)高溫消毒5～10min，冷卻后使用。