[發明專利]一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法

有效

• 申請號: 201310182719.7
• 申請日: 2013-05-16
• 公開（公告）號: CN103278643A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 張宏蓮;李剛;廖玲英;毛紅菊;金慶輝;趙建龍
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海微系統與信息技術研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

1.一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，包括：

以硅片為基底材料，以SU-8光刻膠作為掩模層，分別曝光、顯影制作固定蛋白的模具A和分離檢測模具B；將PDMS和固化劑以重量比5～10：1混合后，分別澆注在模具A和模具B上，加熱固化；分別剝離模具A上的PDMS結構A-PDMS、模具B上的PDMS結構B-PDMS；A-PDMS打進樣孔和出樣孔后，與經過處理的玻璃片貼合，用于固定多個抗體；將A-PDMS揭掉后，將固定有抗體的玻璃片與B-PDMS對準貼合，并取另一經打孔的玻璃片貼合在B-PDMS的另一面，構成玻璃-PDMS-玻璃的夾心結構，即得微芯片。

2.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述A-PDMS的尺寸為100μm高×100μm寬。

3.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述B-PDMS包括血漿分離管道、細胞沉積管道和廢液池，其中血漿分離管道的尺寸為15μm×100μm×23mm，細胞沉積管道的尺寸為100μm×500μm×20mm，廢液池的尺寸為100μm×1.6mm×9mm。

4.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述加熱固化的溫度為90℃，固化的時間為1小時。

5.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述經過處理的玻璃片為經過醛基修飾的玻璃片。

6.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述固定多個抗體的溫度為37℃，時間為2小時；其中，多個抗體具體為BSA、CEA、CyFRA21-1和IgG抗體。

7.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述微量蛋白檢測中的微量蛋白為抗原或抗體。

8.根據權利要求1所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述得到的微芯片配合納米金標記抗體應用于全血中血漿的分離和蛋白質的檢測；具體步驟包括如下：

納米金標記單克隆二抗NP與樣品混合后，加入微芯片的進樣口，通過分離區域時血細胞沉積，同時血漿和NP流入檢測區域，與芯片上固定的單克隆一抗形成NP-抗原-一抗結構，從而造成信號放大，通過納米金顯色得出結果。

9.根據權利要求8所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述納米金標記抗體的制備方法包括：

（1）配置濃度為1mM?HAuCl₄溶液及濃度為38.8mM的檸檬酸三鈉溶液，將HAuCl₄溶液加熱至130℃，20分鐘時加入25ml檸檬酸三鈉溶液，持續攪拌至溶液冷卻至室溫，即形成為酒紅色溶液；以0.22μm硝酸纖維尼龍膜過濾溶液，即可得到顆粒均勻的13nm納米金溶液，4℃保存備用；

（2）取500μl的上述納米金溶液，用碳酸鉀調節pH為8.2，加入30μl的二抗，放置1～2個小時后多次加入4μl的0.1M?NaCl和0.01M?PB，4℃保存。

10.根據權利要求9所述的一種用于微量蛋白檢測的微芯片的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中的納米金溶液濃度為12.2nM，二抗的濃度為0.1mg/ml。