[發明專利]綴合的因子VIII分子

有效

• 申請號: 201310180825.1
• 申請日: 2009-02-26
• 公開（公告）號: CN103497246A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: S.德弗里斯;G.博爾特;B.B.S.范達爾;L.蒂姆;H.R.斯特尼克;T.D.斯蒂恩斯特魯普
• 申請（專利權）人: 諾沃—諾迪斯克有限公司
• 主分類號: C07K14/755
• 分類號: C07K14/755;C12N15/85;C07K1/107;A61K38/37;A61K47/48;A61P7/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍

本申請是國際申請日為2009年2月26日的國際申請PCT/US2009/035339進入中國、申請號為200980106738.3的題為“綴合的因子VIII分子”的發明專利申請的分案申請。?

技術領域

本發明涉及綴合的凝固因子VIII分子。具體地，本發明涉及具有改變的循環半衰期的綴合的因子VIII分子。?

背景技術

A型血友病是由凝固因子VIII(FVIII)活性的缺乏或功能障礙造成的一種遺傳性出血障礙。臨床表現不是在初級止血-正常形成血凝塊-而是由于缺乏次級凝血酶形成所導致的凝塊不穩定。通過靜脈內注射從血液分離的或重組生產的凝固因子FVIII，治療該疾病。?

流行的治療推薦正在從傳統的在要求時(on-demand)治療轉向預防。內源的FVIII的循環半衰期是12-14小時，因而每周需要進行幾次預防性治療，以使患者得到實際上無癥狀的生活。對于許多人，尤其是兒童和年輕人，靜脈內施用伴有顯著的不便和/或疼痛。因而本領域需要新穎的具有因子VIII活性的因子VIII產品，它們優選地在結構上是同質的，優選地是安全的，且優選地具有顯著延長的循環半衰期，以減少每周施用因子VIII的次數。此外，本領域需要相對簡單的得到和生產這種分子的方法。?

本領域已知，為了延長循環半衰期，向因子VIII加入聚乙二醇(PEGylation)。但是，這是得到具有同質結構以及顯著提高的循環半衰期的安全產品的障礙。可得到的生產綴合的因子VIII分子的方法經常是費力的，和/或傾向于導致低得率和/或在結構上不同質的產品。在WO2008011633中已經暗示了人工改造的O-聯糖基化位點用于得到治療蛋白的應用，所述治療蛋白具有延長的治療蛋白循環半衰期，但是，其中沒有公開綴合的因子VIII分子。?

發明內容

在第一個方面，本發明涉及具有改變的循環半衰期的B結構域截短的因子VIII分子，所述分子在截短的B結構域中通過O-聯寡糖與親水聚合物共價綴合，其中因子VIII激活導致共價綴合的側基的去除。?

在其它方面，本發明另外涉及用于得到這種分子的方法，這種分子的用途和包含這種分子的藥物組合物。?

因而，提供了具有改變的循環半衰期的綴合的因子VIII分子，其中綴合的側基(例如親水聚合物)在激活后去除。根據本發明的分子優選地在結構上-至少在親水聚合物在截短的B結構域中的位置這方面-是同質的，且優選地具有有利的安全概況。同樣，本文另外提供了相對簡單的用于得到這種分子的方法。優選地，根據本發明的激活的因子VIII分子類似于內源激活的因子V1II。?

發明詳述?

定義：?

因子VIII分子：FVIII/因子VIII是一種主要由肝細胞產生的大的、復雜的糖蛋白。FVIII由2351個氨基酸組成，包括信號肽，且含有幾個根據同源性定義的不同結構域。存在3個A-結構域，1個獨特的B-結構域和2個C-結構域。結構域次序可以列成NH2-A1-A2-B-A3-C1-C2-COOH。FVIII在血漿中作為在B-A3邊界處分開的兩條鏈進行循環。鏈通過二價金屬離子結合進行連接。A1-A2-B鏈稱作重鏈(HC)，而A3-C1-C2稱作輕鏈(LC)。?

內源的因子VIII分子作為一群具有各種大小的B結構域的分子在體內循環。在體內可能發生的是，B結構域的逐漸酶促去除，從而產生一群具有各種大小的B結構域的分子。一般認為，隨同凝血酶激活發生在位置740處的切割，由此去除B-結構域的最后一部分。但是，不能排除的是，其中例如在位置740的切割位點已經受損的因子VIII變體可能是有活性的。?

本文使用的“因子VIII”或“FVIII”是指一種人血漿糖蛋白，它是內在的凝固途徑的一個成員，且是血液凝固所必需的。“天然的FVIII”是在SEQ?ID?NO.1(氨基酸1-2332)中所示的全長人FVIII分子。B-?結構域跨SEQ?ID?NO1中的氨基酸741-1648。?

SEQ?ID?NO1：?