[發明專利]胃乃安片的質量檢測方法

有效

• 申請號: 201310180746.0
• 申請日: 2013-05-15
• 公開（公告）號: CN104165962A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 陳蔚文;嚴萍;詹若挺;蘇碧茹;梁小銀;林文華;張敏;林傳權;鄧慧敏;賴曉明;劉文惠;謝潔娜
• 申請（專利權）人: 廣州白云山中一藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/88
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;曾旻輝

1.一種胃乃安片的質量檢測方法，其特征在于：所述檢測方法采用以下鑒別和含量測定項目中的一項或多項：

（1）黃芪的薄層鑒別：

a制備供試品溶液：將胃乃安片研細，取1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作為供試品溶液；

b制備黃芪對照藥材溶液：取黃芪對照藥材1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并上層乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；

c制備對照品溶液：取芒柄花素對照品、毛蕊異黃酮對照品、芒柄花苷對照品及毛蕊異黃酮苷對照品，分別加甲醇制成每1ml甲醇含0.8-1.2mg上述對照品的甲醇溶液，作為對照品溶液；

d檢測：取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述黃芪對照藥材溶液各9-10μl和步驟c所述對照品溶液1.8-2.2μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以體積比19-21︰19-21︰8-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；再噴以0.08-0.12%的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼無水乙醇溶液，晾干，置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（2）黃芪、紅參和三七的薄層鑒別，步驟如下：

a制備供試品溶液：將胃乃安片研細，取1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2-3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為供試品溶液；

b制備對照藥材溶液：取黃芪對照藥材1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并下層水液，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2-3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作為黃芪對照藥材溶液；另取紅參對照藥材0.45-0.55g與三七對照藥材0.65-0.75g，分別加水90-110ml，煎煮55-65min，過濾，濾液用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，棄去乙酸乙酯液，再用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，后用氨試液洗滌2-3次，每次28-32ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，分別制得紅參對照藥材溶液和三七對照藥材溶液；

c制備對照品混合溶液：取黃芪甲苷對照品、人參皂苷Rg₁對照品、人參皂苷Rb₁對照品及三七皂苷R₁對照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.8-1.2mg的上述對照品的混合溶液，作為對照品混合溶液；

d檢測：取步驟a所述供試品溶液與步驟c所述對照品混合溶液各1.8-2.2μl、步驟b所述黃芪對照藥材溶液8-12μl、紅參對照藥材溶液5-7μl和三七對照藥材溶液0.8-1.2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比3.5-4.5:1:4.5-5.5的正丁醇-乙酸乙酯-稀氨的上層溶液為展開劑，置于濃氨試液預飽和20分鐘的展開缸內，展開，取出，晾干，噴以9-11%硫酸乙醇溶液，在100-110℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；置365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點；

（3）人工牛黃的薄層鑒別：

a制備供試品溶液：將胃乃安片研細，取0.18-0.22g，加甲醇18-22ml，超聲處理，過濾，蒸干濾液，殘渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作為供試品溶液；

b制備對照藥材溶液：取人工牛黃對照藥材8-12mg，加甲醇1.5-2.5ml，超聲處理，離心，取上清液作為對照藥材溶液；

c制備對照品溶液：取膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品，分別加甲醇制成每1ml甲醇中含0.8-1.2mg上述對照品的溶液，作為膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液；

d檢測：取步驟a所述供試品溶液、步驟b所述對照藥材溶液和步驟c所述膽酸對照品溶液和豬去氧膽酸對照品溶液各0.8-1.2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22:23-27:2.5-3.5:1.5-2.5的環己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以9-11%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

（4）胃乃安片的高效液相色譜定性鑒別，包括如下步驟：

a色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫，PDA/ELSD串聯檢測；所述PDA的檢測波長為260nm；ELSD參數為：漂移管溫度：60℃，載氣流速：35psi，增益值：200；理論板數按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb₁峰計算均應不低于5000；所述梯度洗脫為：0-32min，5%→18%乙腈；32-38min，18%→22%乙腈；38-58min，22%乙腈；58-70min，22%→32%乙腈；70-84min，32%→34%乙腈；84-96min，34%乙腈；96-102min，34%→40%乙腈；102-125min，40%→67%乙腈；

b制備參照物溶液：取毛蕊異黃酮苷與人參皂苷Rb₁對照品，分別加甲醇制成濃度為38-42μg/ml的毛蕊異黃酮苷甲醇溶液和濃度為0.13-0.17mg/ml的人參皂苷Rb₁甲醇溶液；

c制備供試品溶液：將胃乃安片研細，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；

d檢測：在步驟a所述色譜條件下進行檢測；

（5）胃乃安片的高效液相色譜定量測定，包括如下步驟：

a色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈為流動相A，0.1%甲酸為流動相B，梯度洗脫，用PDA/ELSD串聯檢測；所述PDA的檢測波長為260nm；ELSD參數為：漂移管溫度：60℃，載氣流速：35psi，增益值：200；理論板數按毛蕊異黃酮苷峰和人參皂苷Rb₁峰計算均應不低于5000；所述梯度洗脫為：0～32min：5%→18%乙腈；32～38min：18%→22%乙腈；38～58min：22%乙腈；58～70min：22%→32%乙腈；70～84min：32%→34%乙腈；84～96min：34%乙腈；96～102min：34%→40%乙腈；102～125min：40%→67%乙腈；

b制備混合對照品溶液：取毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁、人參皂苷Re、人參皂苷Rb₁、膽酸與豬去氧膽酸對照品，加甲醇制成每1ml甲醇含毛蕊異黃酮苷38-42μg、芒柄花苷7-9μg、毛蕊異黃酮18-22μg、芒柄花素5-7μg、三七皂苷R₁0.13-0.17mg、人參皂苷Rg₁0.28-0.32mg、人參皂苷Re38-42μg、人參皂苷Rb₁0.13-0.17mg、膽酸0.45-0.55mg、豬去氧膽酸0.35-0.45mg的混合對照品溶液；

c制備供試品溶液：將胃乃安片研細，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48-52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，過濾，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；

d檢測：在步驟a所述的色譜條件下，吸取對照品溶液5μ1、20μl，供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，其中PDA檢測以外標一點法計算，ELSD檢測以外標兩點法對數方程計算，即得；

（6）黃芪甲苷的高效液相色譜定量測定：

a色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為30︰70的乙腈-水為流動相；蒸發光散射檢測器檢測；理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于5000；

b對照品溶液的制備：取黃芪甲苷對照品加甲醇制成濃度為0.45-0.55mg/ml的黃芪甲苷對照品甲醇溶液；

c供試品溶液的制備：將胃乃安片研細，取粉末1.3-1.7g，加甲醇48-52ml，超聲處理，放至室溫后，用甲醇補足減少的重量，搖勻，濾過，取濾液23-27ml，蒸干，殘渣加水18-22ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3-4次，每次38-42ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2-3次，每次38-42ml，棄去氨液，將正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；

d檢測：吸取對照品溶液5μl、15μl，供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數方程計算，即得。