[發明專利]一種用于組織培養楝樹幼苗的方法

有效

• 申請號: 201310177348.3
• 申請日: 2013-05-14
• 公開（公告）號: CN103299902A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 王臺虎
• 申請（專利權）人: 王臺虎
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京中新達專利代理有限公司 32226
• 代理人: 陳偉;朱杰

1.一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟如下：

(1)采集外殖體：剪下枝梢半木質化部分；

(2)外殖體消毒：在無菌的狀態下，用消毒試劑進行消毒；所述消毒試劑成分為0.1％～0.2％高錳酸鉀m/v，10％～20％次氯酸鈉溶液v/v，1mL/100mL吐溫水，無菌水，1mL/50mL山農一號I型水，50mg/L鏈霉素、50mg/L頭孢霉素、50mg/L制霉菌素，二甲基亞砜；

(3)初代培養：將外殖體轉接到初代培養基中培養2-3個月；所述培養基為MS基本培養基添加蔗糖20～60g，椰子汁20～100ml，活性炭0.5～2g，細胞分裂素噻重氮苯基脲0.1～0.5mg，山農1號II型1～4mL，卡拉膠3～10g，水至1升，調節pH至5.8～6.2；

(4)誘導產生愈傷組織：將外殖體轉接到新的愈傷組織的培養基中；所述培養基為MS培養基中添加蔗糖20～100g，椰子汁20～100ml，6-(N-芐基)氨基嘌呤0.5～2mg，萘乙酸0.005～0.02mg，卡拉膠3～10g，水至1升，調整pH至5.8～6.2；

(5)利用愈傷組織誘導不定芽：將愈傷組織放入培養基中誘導不定芽；所述培養基是在正常的MS培養基中加入蔗糖20～100g，椰子汁20～100ml，6-(N-芐基)氨基嘌呤0.2～1mg，萘乙酸0.05～0.2mg，卡拉膠3～10g，水至1升，調節pH到5.8～6.2；

(6)增殖培養：轉接一次到增殖培養基中；所述增殖培養基為MS培養基中加入蔗糖20～100g，椰子汁50～200ml，6-(N-芐基)氨基嘌呤0.2～1mg，萘乙酸0.05～0.2mg，卡拉膠3～10g，水至1升，調節pH至5.8～6.2；

(7)生根培養：將枝干切成小段，接種到生根培養基中；所述生根培養基為MS培養基中加入蔗糖40～80g，椰子汁20～100ml，吲哚丁酸0.5～2mg，卡拉膠5～10g，水至1升，調整pH至5.8～6.2；置于20～28℃、1000～3000lux光照條件下培養；

(8)出瓶移栽：移栽組培苗可用椰糠和土的混合物作為基質，其比例在0～2∶1之間，在植株的根長至3～5cm長時，即可出瓶移栽，移栽前用1‰的多菌靈浸泡，栽入育苗杯中，澆透水后用地膜覆蓋，培養。

2.根據權利要求1所述的一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟(3)所述的培養基優選為MS基本培養基中添加蔗糖40g，椰子汁50ml，活性炭1g，細胞分裂素噻重氮苯基脲0.2mg，山農1號II型2mL，卡拉膠7g，水至1升。

3.根據權利要求1所述的一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟(4)所述的培養基優選為MS培養基中添加了蔗糖40～80g，椰子汁50ml，6-(N-芐基)氨基嘌呤1.0mg，萘乙酸0.01mg，卡拉膠7g，水至1升。

4.根據權利要求1所述的一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟(5)所述的培養基優選為MS培養基中加入了蔗糖40～80g，椰子汁50ml，6-(N-芐基)氨基嘌呤0.5mg，萘乙酸0.1mg，卡拉膠7g，水至1升。

5.根據權利要求1所述的一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟(6)所述的培養基優選為MS培養基中加入蔗糖40～80g，椰子汁100ml，6-(N-芐基)氨基嘌呤0.5mg，萘乙酸0.1mg，卡拉膠7g，水至1升。

6.根據權利要求1所述的一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟(7)所述的培養基優選為MS培養基中加入了蔗糖40～80g，椰子汁50ml，吲哚丁酸1.0mg，卡拉膠7.5g，水至1升，置于25±2℃、2000±500lux光照條件下。

7.根據權利要求1所述的一種用于組織培養楝樹幼苗的方法，其特征在于步驟(8)中的基質為椰糠∶土＝1∶1的土壤。